n-硬脂酰酪氨酸介导内源性大麻素失活系统的神经保护作用及其机制研究

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1、万方数据上海交通大学医学院博士研究生毕业论文(2014)◎上海交通大学医学院2014届博士研究生学位论文N一硬脂酰酪氨酸介导内源性大麻素失活系统的神经保护作用及其机制研究博士研究生崔垣董专业荭堡堂2014年4月本课题得到国家自然科学基金(No．30873057，81171245)及上海市科委基础重点项目(No．08JCl413600，11JCl406600)的资助。万方数据上海交通大学医学院博士研究生毕业论文(2014)上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指

2、导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者繇黼日期：列妒年f月眵日万方数据上海交通大学医学院博士研究生毕业论文(2014)上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上

3、海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”)学位论文储虢膨唠日期：矽～年J月≯日指导教师签名：P移黾甄加

4、悔≤睫毕B万方数据上海交通大学医学院博士研究生毕业论文(2014)N—硬脂酰酪氨酸介导内源性大麻素失活系统的神经保护作用及其机制研究自上个世纪90年代初期发现了内源性大麻素系统以来，目前被证实的内源性大麻素有N．花生四烯酸乙醇胺(an

5、andamide，AEA)和2一花生四烯酰甘油(2．arachidonoylglycerol，2-AG)，它们通过作用于大麻素受体CBl和CB2发挥生物活性。大量研究表明，内源性大麻素具有神经保护活性，因此内源性大麻素作用的内源性大麻素系统被认为是新型神经保护药物的靶点。近年来，内源性大麻素的失活系统逐渐成为上述研究的新热点。在前期工作中，我们合成了一系列结构与AEA相似的脂氨基酸类化合物，研究中我们通过大鼠离体脑片的缺氧缺糖损伤和原代皮层神经元的损伤实验筛选出了具有良好的神经保护作用的N一硬脂酰

6、酪氨酸(N—stearoyltyrosine，NsTyr)。本研究以NsTyr为研究对象，采用SD大鼠原代神经元Ap损伤模型和OGD损伤模型探讨其神经保护活性以及其通过内源性大麻素失活系统介导的神经保护的机制。万方数据上海交通大学医学院博士研究生毕业论文(2014)第一章N．硬脂酰酪氨酸对抗Ap损伤和OGD损伤的神经保护作用B淀粉样蛋白(A13)被认为是阿尔茨海默症的主要致病原因，缺血再灌注是脑卒中损伤及其炎症反应和氧化损伤的主要原因。由于缺乏有效的防治方法和手段，使得阿尔茨海默症和脑卒中影响着人

7、们的生活质量，并造成了社会经济负担。本研究采用了SD大鼠皮层神经元建立A13损伤模型和OGD损伤模型，评价了NsTyr的抗Ap毒性和抗OGD损伤神经元的神经保护作用。我们采用10}tg／mLA13(1-40)片段建立Ap损伤模型；采用缺氧缺糖1h恢复培养24h的处理流程建立OGD损伤模型。通过MTT检测和LDH检测，我们发现1—20gmol／LNsTyr对A13损伤和OGD损伤的原代皮层神经元具有保护作用，10gmol／LNsTyr对Ap损伤和OGD损伤诱导的神经元损伤的保护作用最强；结果还验证了

8、AEA直接给药的局限性。WesternBlot检测表明NsTyr可以上调神经元中大麻素受体CBl的表达，进一步提示了NsTyr的神经保护作用与内源性大麻素系统有关。第二章N．硬腊酰酪氨酸通过抗凋亡途径对抗Ap损伤和OGD损伤的神经保护作用内源性大麻素的神经保护作用及其本身作为神经保护药物局限性的报道促使人们把研究重点放在寻找内源性大麻素介导的高效低万方数据上海交通大学医学院博士研究生毕业论文(2014)毒神经保护剂上。本文研究通过Hoechst33342染色和TUNEL荧光染色发现AD和OGD诱导

9、的神经元损伤是通过凋亡途径实现的，而NsTyr确能有效抑制这两种损伤模型的神经元凋亡。在损伤后和NsTyr处理后，采用WesternBlot检测促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl一2的表达，结果表明NsTyr可以下调损伤引起的Bax表达升高，并可上调损伤引起的Bcl．2表达降低。同样观察到NsTyr可以通过上调ERK的磷酸化达到抑制损伤诱导的细胞凋亡的作用。这些结果表明NsTyr通过抗凋亡途径发挥对抗Ap损伤和抗OGD损伤的神经保护作用。通过MTT检测、LDH检测和WesternB