mirna-4530在人脐静脉内皮细胞中作用的研究

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1、万方数据论文题目：塑i坠坠：垒蔓3Q垄厶盛登拯凼麈细胞生簋旦的婴塞答辩委员会主席：崔太搓教援答辩委员会成员：廑尘堡数援虫圭发数捶论文答辩日期：21c!15一∞．24万方数据目录中英文缩略词对照袁⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9第一部分miRNA．4530靶基因的3、UTR验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11材料与方法⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15分析及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18第二部分miRNA一4530对HUVEC细胞管腔形成的影响⋯⋯⋯⋯．19材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21分析及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23第三部分转染miRNA．4530的HUVEC细胞miRNA、mRNA和VASH-1蛋白验证实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33分析及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42附i乏⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．47综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．60万方数据中英文缩略词对照表万方数据温州医科大学硕士毕业论文miRNA．4530在人脐静脉内皮细胞中作用的研究中文摘要第一部分miR-4530靶基因的预测分析及3"UTR验证目的通过生物信息学软件TargetScanHuman6．2预测分析miR-4530的靶基因并筛选出作为研究对象的靶基因，将miR-4530质粒与携带有靶基因的3、UTR序列的荧光素酶报告载体(psiCHECK一2)的重组质粒共转染人肾上皮细胞(2

5、93T细胞)，利用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性，分析miR．4530与靶基因之间是否存在靶向性的结合。方法1)使用生物信息学软件TargetScaHuman6．2预测分析，筛选出与miR-4530相关性最高的5个靶基因。2)将含有己确定靶基因的3、UTR的重组质粒分别与miR-4530质粒、NC质粒和空白对照(不含质粒)共转染293T细胞。3)通过双荧光素酶报告基因系统检测miR一4530与相应靶基因是否存在靶向性结合关系。结果11通过生物信息学软件TargetScanHurnan6．2筛选出miR-4530对应的5个

6、相关性高的靶基因包括：RASAl(RASp21proteinactivator1)、PTCD3(Pentatricopeptiderepeatdomain3)、PANKl(Pantothenatekinase1)、FGFRl(Fibroblastgrowthfactorreceptor1)和VASHl(Vasohibin1)，通过查阅文献并确定VASHl为靶基因。2)双荧光素酶报告基因实验显示，共转染组的荧光素酶活性分别与NC组和对照组相比，荧光素酶的活性均出现降低，有非常显著的统计学差异(P<0．001V．S．NC，P<0

7、．001V．S．空白对照)。结论筛选出miR-4530可能的5个相关性高的靶基因，并通过查阅文献，最终确定靶基因为VASHl。双荧光素酶报告基因实验显示，过表达miR．4530质粒可以万方数据温州医科大学硕士毕业论文与VASHl的3’UTR全序重组质粒特异性结合，并抑制下游荧光素酶的表达，确定VASHl是miR-4530的直接靶向基因。第二部分miR．4530对HUVEC细胞管腔形成的影响目的将miR．4530mimics、mimicsNC、miR．4530inhibitor、inhibitorNC分别转染HUVEC细胞后，

8、通过基质胶成管实验观察miR一4530是否对HUVEC细胞管腔形成能力产生影响。方法1)通过HUVEC细胞转染不同浓度NC．FAM，观察转染后的荧光确定最适合的转染浓度。2)HUVEC细胞分别转染miR-4530mimics、mimicsNC、miR．4530inhibitor、inhib