mir-33a调控人非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的机制研究

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1、硕士学位论文论文题目：miR-33a调控人非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的机制研究学号：_________________________1111075016姓名：_________________________杨丽华生物化学与分子生物学专业名称：_________________________医学院学院：_________________________龚朝辉指导教师：_________________________论文提交日期：2014年4月15日万方数据AThesisSubmittedtoNingboUniversityforthe

2、Master’sDegreeThemechanismstudyonmiR-33aregulatingepithelial-mesenchymaltransitioninNSCLCcellsCandidate：LihuaYangSupervisor：ProfessorZhaohuiGongFacultyofMedcineNingboUniversityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINADate:2014/4/15万方数据独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了

3、文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。签名：___________日期：____________关于论文使用授权的声明本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循

4、此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________万方数据宁波大学硕士学位论文miR-33a调控人非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的机制研究摘要背景和目的微RNA(microRNA,miRNA)是一类非编码小RNA，长约22nt，其可通过与靶基因mRNA的3’-UTR碱基互补配对，从而抑制靶基因的表达。近年来，miRNA被报道参与肿瘤转移，但其调控肿瘤转移的分子机制有待进一步研究。上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)，最显著的标志就是上皮标志物的丢

5、失和间叶标志物表达上升，其可使上皮细胞转变成具有迁移能力的间质型细胞，已被报道不仅参与胚胎发育过程中的组织形成而且是增强肿瘤细胞侵袭和转移能力的主要机制。但是，其调控信号通路和具体机制仍未完全阐明。越来越多的研究表明，包括人类肿瘤增殖和肿瘤转移在内的人类疾病可能与某些特定的miRNA表达异常有关。这些研究结果均提示我们，一些miRNA可参与调控EMT。miR-33a，在代谢和代谢性疾病中经常出现异常表达，但它在EMT和转移中的作用至今研究甚少。本课题中我们主要研究miR-33a在人非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,

6、NSCLC）细胞EMT中的作用及其相关作用机制。方法（1）通过生物信息学法筛选发现miR-33a与EMT相关基因Twist1之间的潜在靶点关系。（2）根据miRNA设计原则设计合成miR-33a的mimics、inhibitor及其阴性对照。用脂质体将miR-33a的mimics和inhibitor分别转染NCI-H1299和SPC-A-1细胞，分别提高和降低细胞内相应miRNA的水平，并用荧光定量RT-PCR分析转染后miR-33a细胞中的表达变化以确认转染效果。（3）用荧光定量RT-PCR分析细胞转染相应miR-33a的mimics、in

7、hibitor后Twist1在mRNA表达水平上的变化，同时用WesternBlot分析Twist1蛋白表达变化。（4）用双荧光素酶分析系统进一步确认miR-31与Twist1之间的靶点调控关系。（5）应用荧光定量RT-PCR和WesternBlot以及划痕实验和Transwell侵袭实验分别I万方数据miR-33a调控人非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的机制研究分析转染miR-33amimics，miR-33ainhibitor和Twist1siRNA后NSCLC细胞EMT及转移能力的变化，评价miR33a和Twist1表达水平变化对NSCLC

8、细胞EMT和转移的影响。结果（1）不同转移能力的NSCLC细胞中，其miR-33a的表达亦有显著性差异，miR-33a的表达与NSCLC细胞迁移能力呈负相关。（2）