microrna21在胃癌中的作用及相关机制研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目:丛iQ[Q8堂至!查置疸生的佳屡壁相差扭剑篮窒答辩委员会主席:答辩委员会成员:万方数据温州医科大学硕士学位论文中文摘要英文摘要前言目录一1—3—6—9181920303335第一部分人胃癌细胞株全基因组miRNAs表达谱特征材料方法二结果三讨论四小结第二部分早期胃癌特征性miRNAs芯片筛选材料方法二结果一三讨论一四小结一第三部分miR一21在胃癌组织中的表达水平及临床意义研究材料结果讨论小结方法36434648四部分在组织水平初步探讨miR-21促进胃癌进展的分子机制49、胃癌组织中miR-21上调与RECK/MMP2/MMP9及MMPl4m

2、RNA表达平的相关性研究一材料方法49二、O同E7癌组织中miR一21上调与RECK/MMP2/MMP9及MMPl4蛋白表达水平的相关性研究材料方法结果讨论小结54607276第五部分在细胞水平探讨miR-21促进胃癌进展的分子机制~77一、miR-21在5株胃癌细胞中的表达77一二三四第一水一万方数据温州医科大学硕士学位论文材料方法二结果三讨论二、细胞功能实验材料方法二结果三讨论四小结77828384879293第六部分胃癌患者循环miR-21检测及临床意义价值研究⋯一94材料方法二结果一三讨论一四小-结一全文总结参考文献附录一9410110410610710812121416123

3、论文发表及参与课题情况致谢综述:胃癌中微小RNA相关研究进展学位论文独创性声明万方数据温州医科大学硕士学位论文MicroRNA21在胃癌中的作用及相关机制研究中文摘要研究背景及目的:胃癌是世界高发恶性肿瘤之一,其发病率高、恶化快、转移早、预后差,根治性手术机会少,5年生存时间短。随着现代医学的不断发展,胃癌在手术、新辅助化疗等综合治疗下,5年生存时间得到一定的提高,但是仍然严重威胁着患者的生命健康及生活质量。因此,对胃癌发病机制的研究,并寻找早期诊断、疗效及预后评估的标记物是亟待解决的问题。微小RNA(microRNA,miRNA)由22--一25个核苷酸构成的内源性丰富的单链非编码R

4、NA,它通过抑制mRNA翻译和(或)促进mRNA降解来调控蛋白的表达。胃癌的发生、发展是个多步骤多因素的演变过程,大量的研究证实microRNAs的异常表达在其发生、发展中也起着一定的作用。RECK(reversion—inducing—cysteine—richproteinwithkazalmotifs)作为抑癌基因,最重要的作用是对基质金属蛋白酶(MMPs)的抑制作用,而且已经证实其与肿瘤转移及浸润相关。本次实验旨在系统研究miR-21在胃癌中的作用机制。材料方法:①采用昂飞人全基因组表达谱芯片检测胃癌细胞株AGS中miRNAs表达情况。②CancerMicroRNAsArray

5、检测胃癌细胞株AGS及组织中miRNAs表达情况。③采用TaqManRealTimePCR方法进一步检测miR一21在40例健康人、48例慢性萎缩性胃炎患者、37例胃不典型增生患者及60例胃癌患者中表达水平,RECK/MMP2/删P9/MMPl4在60例胃癌组织及配对的癌旁正常组织中的表达倍数。④采用Wb(westernblot)及免疫组化方法对RECK/MMP2/删P9/删P14在胃癌组织中的蛋白表达水平检测。应用细胞转染方法,探讨miR~21的可能作用机制。⑤采用TaqManRealTimePCR方法检测40例健康人、48例慢性萎缩性胃炎患者、37例胃不典型增生患者及60例胃癌患者

6、外周血中miR一21的表达水平。结果:@miR-21在两种芯片中呈高表达;②组织验证结果显示miR一21在60例胃癌组织中呈现高表达,miR-21高表达与淋巴浸润、静脉侵犯、T、N及临床分期有关,P均<0.05。miR-21在健康人胃组织中、慢性萎缩性胃炎组织中及不典型增生患者胃组织中的表达倍数低于胃癌患者组织内的表达倍数;miR-21在早期胃癌中的表达倍数要低于晚期胃癌组织中的表达倍数。随着病变程度的不断加深,miR-21的表达倍数也在不断的升高,尤其是在胃癌的晚期。miR-21的高表达对胃癌患者的生存预后也产生一定的作用。无论在早期还是晚期胃癌组织中,在有无淋巴结转移的胃癌组织中,

7、RECK的mRNA水平均较删P2/删P9/删P14万方数据温州医科大学硕士学位论文的mRNA水平低。③wb实验结果可以看出REcK/删P2/删P9/MMPl4蛋白在癌组织中的蛋白水平高于癌旁正常组织中的蛋白水平。60例胃癌组织RECK/脚P2/删P9/删P14免疫组化结果,RECK在胃癌组织中阴性及弱阳性率分别为98.3%、1.67%,强阳性率为0,而在癌旁正常组织中的阴性及弱阳性率分别为0、3.30%,强阳性率为96.7%。MMP2在胃癌组织

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