e3泛素连接酶herc4在乳腺癌中的表达及其功能研究

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文E3泛素连接酶HERC4在乳腺癌中的表达及其功能研究TheStudyonExpressionandFunctionofE3UbiquitinLigaseHERC4inBreastCancer课题来源：广东省领军人才项目学位申请导师姓专业名培养类培养层所在学人周晖名马文丽教授称生物化学与分子生物学型学术型次硕士研究生院基因工程研究所答辩委员会主席陈蔚文教授答辩委员会委员郭俊教授白晓春教授孙晗笑教授庞义教授论文评阅人高国全教授费嘉教授2014年5月日广州硕士学位论文E3泛素连接酶HERC4在乳腺癌中的表达及其功能研究硕士研究生：周晖指导教师：马文丽教

2、授摘要乳腺癌发病率及死亡率高，已经成为威胁现代女性健康排名第一的恶性肿瘤。与发达国家相比，中国乳腺癌发病率虽然相对较低，但近年来有明显增长趋势。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据显示：女性乳腺癌发病率(粗率)全国合计约为43／10万，城市为52／10万，农村为23／10万。过去数十年，虽然对于乳腺癌的临床研究取得了较大进展，但乳腺癌的发病机理尚不完全清楚。总的来说，乳腺癌的发生与基因组不稳定和突变有密切关系，基因表达失控和蛋白调节紊乱现象的积累最终导致了乳腺癌的发生与发展。泛素．蛋白酶体系统(ubiquitin．proteaSomesys

3、tem，UPS)在调节体内蛋白质动态平衡从而调控一系列生理过程中起到了重要的作用。除此之外，越来越多的证据表明，UPS功能失调与乳腺癌的发生、发展密切相关。因此，从UPS功能失调方面去揭示乳腺癌发生过程中的基因表达失控和蛋白调节紊乱的原因，将有助于进一步阐明乳腺癌的发病机制，从而为乳腺癌的早期诊断和靶向治疗提供线索。E3泛素连接酶是对底物蛋白具有特异性识别作用的酶类，在泛素化途径中起到关键作用。目前主要将E3泛素连接酶分为三大类：HECT结构域家族、对NG结构域家族和U．box结构域家族。HECT结构域与对于底物蛋白p53有泛素连接酶活性的E6相关蛋白的羧基端(carboxyl—

4、teminalregionE6-associatedprotein)具有50％的序列相似性。摘要HERC4属于HECT家族，基因定位于染色体10q21．3，全长4531个碱基，编码1057个氨基酸。HoclⅡainer于2005年首次鉴定出HERC4具有泛素连接酶活性。然而HERC4在肿瘤中的生理功能和下游作用的靶分子尚无公开报道。因此，本研究通过基因表达分析、干扰HERC4分析、基因芯片分析和生物信息学分析，研究HERC4在乳腺癌组织中的表达，分析其与乳腺癌的关系，探讨HERC4的生理功能以及其参与乳腺癌发生的分子调控网络。本文的研究内容主要包括以下4个部分：第一部分：HERC

5、4在乳腺癌组织中的表达及临床意义。我们首先通过实时荧光定量PCR和westemblot检测32对新鲜乳腺癌组织(13例导管内癌，19例浸润性导管癌)和配对癌旁乳腺组织lIl】[埘A和蛋白表达水平，分析组间表达差异。并用组织芯片和免疫组织化学的方法检测164例甲醛固定石蜡包埋的乳腺(癌)组织标本中(16例癌旁乳腺组织，13例良性纤维瘤，15例导管内癌和120例浸润性导管癌)HERC4蛋白表达水平，并用ROC曲线分析HERC4高表达的最佳取舍点(cut．o行值)，分析其在乳腺癌组织中的表达情况以及其与临床病理的联系。实时荧光定量PCR结果显示，HERC4mRNA在乳腺癌组织中的表达明

6、显高于癌旁乳腺组织，平均提高6．38倍，且差异具有统计学意义(P

7、达率为6．3％，良性纤维瘤为23．1％，导管内癌为40％，浸润性导管癌为55％，且差异具有统计学意义(P