骨形成蛋白7对肝纤维化中e3泛素连接酶表达的干预研究

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1、温州医学院硕士学位论文骨形成蛋白7对肝纤维化中E3泛素连接酶表达的干预研究姓名：申春燕申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：陈永平2012-05骨形成蛋白7对肝纤维化中E3泛素连接酶表达的干预研究摘要目的：探索E3泛素连接酶Arkadia在四氯化碳致小鼠肝纤维化中的动态表达，以及BMP7对其阻断作用。方法：30只健康雄性ICR小鼠，随机分为正常对照组(6只)、模型组(18只)和BMP7干预组(6只)；模型组再按不同的时间点分为4周、8周、12周3个亚组。在小鼠双后肢皮下交替注射60％四氯化碳／花生油溶液(5ml／Kg)，每周2次，

2、共持续12周，制备肝纤维化模型；BMP7干预组在皮下注射四氯化碳的同时，从第9周始腹腔注射骨形成蛋白7(300pg／g)溶液，隔天一次，共4周。苏木素一伊红(HE)和Masson染色观察肝组织病理变化；用反转录酶一聚合酶链锁反应(RT—PCR)，免疫组化和免疫印记(westernblotting)法检测肝组织中Arkadia信使核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达。结果：成功建立了肝纤维化模型。模型组ArkadiamRNA的表达量在纤维化过程中逐渐升高，BMP一7干预组其表达量又降低，与对照组相比，差异有统计学意义(F=812．801，

3、P

4、肝纤维化作用并可以抑制纤维化过程中Arkadia的表达。关键词肝纤维化；E3泛素连接酶Arkadim骨形成蛋白一7；转化生子因子B1；动物模型2Interventionolbonemorphogeneticprotein-70ntlle—J●n’’···一一’expressionofE3ubiquitinligaseintheliverfibrosisprogressionAbstractobjectiveToobservethedynamicexpressionofE3ubiquitinligaseArkadiainmicemod

5、elofliverfibrosis，andtheexpressionchangeafterBMP-7treatment．MethodsThirtyhealthymaleICRmicewererandomlyassignedtothreegroups：normal(n=6)，modelgroup(n218)andtreatmentgroupofBMP7(n26)；Modelgroupwasfurtherdividedintothreesubgroups(n26×3)accordingtodifferenttimepoints：4，8a

6、nd12weeks．Liverfibrosiswasinducedbyalternatelyrepeatedhypodermicinjectionof60％CCL4／peanutoil(5ml／Kg)tothehindlegsofmice，and2timesperweekforaperiodof12weeks．ForBMP一7treatmentgroup，miceweretreatedbyrepeatedintraperitonealinjectionofbonemorphogeneticprotein一7(BMP．7，300pg／

7、g)from9weeksatthesametimerepeatedhypodermicinjectionof60％CCLdpeanutoil，andeveryotherdayforaperiodof4weeks．ThepathologicalchangesofliverwereobservedbyHematoxylin-Eosin(HE)andMassonStaining．MessengerRNA(mRNA)andproteinexpressionofliverArkadiawereevaluatedusingRT-PCR，immu

8、nohistochemistryandwesternblotting．ResultsMicemodelsofliverfibrosisweresuccessfullyestablished．ThegeneexpressionofArk