abcc4基因在nkt细胞淋巴瘤中的表达和意义

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheExpressionandMeaningofABCC4GeneinNK／TCellLymphomaByLIRUPINGSupervisor：Prof．MingzhiZhangTheDepartmentofOncologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独

2、立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：巷农翠同期：乃怡年S月≥o同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进

3、行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：巷乡女耳日期：刻上f年生月30日摘要背景：ABCC4基因在NIGT细胞淋巴瘤中的表达和意义研究生李汝平导师张明智郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052NK／T细胞淋巴瘤(NKTCL)是恶性淋巴瘤的一种亚型，高发于亚洲和南美洲人群。在发病机制、诊断分型及临床治疗上都比较复杂。早期肿瘤比较局限，但可

4、以很快发展至全身。具有侵袭性高，病程进展快，生存期短，对含蒽环类化疗方案耐药和预后差等特点。因此，寻找其发病原因及耐药机制十分必要。目的：1．检测ABCC4基因在NK／T细胞淋巴瘤细胞株和组织中的表达情况。2．探讨ABCC4基因表达情况和临床疗效的关系。3．构建ABCC4基因高表达和干扰表达慢病毒载体，进一步检测其表达量对NK／T细胞淋巴瘤的影响。摘要方法：1．利用数字基因表达谱(digitalgeneexpression，DGE)技术和耐药相关基因PCR基因芯片技术初步检测出ABCC4基因在NK／T细胞淋巴

5、瘤细胞株中的表达情况。2．应用实时荧光定量PCR(Realfime-PCR)技术检测NK／T细胞淋巴瘤SNK．6、YTS细胞株与正常NK细胞ABCC4基因的表达情况。3．免疫组织化学法(IHC)检测110例组织标本其中NK／T细胞淋巴瘤(60例)组织及鼻炎和鼻息肉组织(50例)中ABCC4基因蛋白表达水平。4．根据ABCC4基因mRNA序列，设计二个靶向ABCC4基因的靶点，设计shRNA序列。设计引物，PCR扩增ABCC4基因cDNA序列，测序鉴定，构建慢病毒载体pCDH．ABCC4和pLL3．7．ABCC

6、4．siR。制备出重组慢病毒Lenti—ABCC4和Lenti。ABCC4．siR。5．通过Realfime-PCR和Westernblot技术评价感染慢病毒后的NⅪT细胞淋巴瘤细胞株ABCC4基因表达情况，同时筛选出沉默效率最高的shRNA。6．CCK一8实验和流式细胞术实验检测不同药物作用于正常表达及高表达和低表达ABCC4基因NK／T细胞淋巴瘤细胞株的敏感性。结果：1．实时荧光定量PCR(Realtime．PCR)技术和免疫组织化学法结果显示，与正常NK细胞相比较，ABCC4基因在NK／T细胞淋巴瘤细胞

7、株和组织上高表达，其表达量的高低和临床疗效呈负相关。2．成功构建了慢病毒表达载体pCDH-ABCC4、pLL3．7．ABCC4．siR，并制备出重组慢病毒Lenfi．ABCC4和Lenti—ABCC4．siR，筛选出有效的干扰重组病毒，感染NK／T细胞淋巴瘤细胞株后能有效提高和降低ABCC4基因的表达。3．降低ABCC4基因的表达能提高NK／T细胞淋巴瘤细胞株对不同化疗药物的敏感性。II摘要结论：1．多药耐药相关蛋白基因4(ABCC4基因)在NK／T细胞淋巴瘤中高表达。2．成功制备出重组慢病毒Lenti．AB

8、CC4和Lenti．ABCC4．siR能有效提高和降低ABCC4基因在NK／T细胞淋巴瘤细胞株中的表达。3．降低ABCC4基因在NK／T细胞淋巴瘤细胞株中的表达量，可以提高化疗药物的作用效果。关键词：ABCC4基因NK／T细胞淋巴瘤慢病毒载体化疗药物IIIAbstractTheExpressionandMeaningofABCC4GeneinNK／TCellLymphomaPostgraduate：