1、omentin-1对人成骨细胞增殖的作用及机制研究2、ghrelin对opg基因敲除小鼠动脉钙化的影响

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1、万方数据中图分类号UDCR589．5610硕士学位论文学校代码—』5堑1、Omentin一1对人成骨细胞增殖的作用及机制研究2、Ghrelin对OPG基因敲除小鼠动脉钙化的影响1．MechanismstudyoftheEffectsofOmentin--1ontheProliferationofHumanosteoblasts2．EffectofGhrelinonthearterialcalcificationofosteoprotegeringeneknockoutmice作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)

2、：指导教师：吴珊珊临床医学内科学湘雅二医院袁凌青副教授论文答辩日期堂!兰：兰：!芝答辩委员会主席中南大学二。一四年五月万方数据学位论文原创性声明删本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名．．枉日期：必

3、』二月尘日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本!学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作老敛砭．募渺’作者签名：笾竺竺日期：!兰年三月堕日导师签越万方数据硕士学位论文中文摘要摘要第一部分Omentin．1对人成骨细胞增殖的作用及机制研究目的：网膜素(Omentin．1)

4、是近年来发现的一种主要由网膜脂肪组织分泌的脂肪因子，研究表明Omentin．1参与调控胰岛素敏感性、心血管功能、炎症反应及骨代谢等生理过程。我们近期的研究发现Omentin一1在护骨素(OPG)基因敲除或卵巢切除的小鼠中通过调控成骨细胞增殖和分化发挥骨保护作用。但是关于Omentin．1对人成骨细胞(hOB)增殖的作用及相关机制的研究仍较少，本研究旨在检测Omentin一1对hOB增殖的影响及信号转导机制。方法：原代hOB取材于人的松质骨，用不同浓度Omentin一1(25，50，100，200ng／m1)qZ预48h

5、，用[3HI胸腺嘧啶核苷酸掺入法评价细胞增殖的水平；WesternBlot检测磷脂酰肌醇3激酶(P13K)下游底物Akt的活化；通过小分子干扰核糖核酸(siRNA)技术阻断Akt，联合P13K信号转导阻断剂LY294002和舭信号转导阻断剂HIMO干预hOB后，观察Omentin一1对hOB增殖及信号转导机制的影响。结果：25"---200ng／mlOmentin—l能促进hOB增殖，且呈浓度依赖效应，0mentin．1浓度为200ng／ml时，促进细胞增殖呈最大效应；Omentin一1能诱导Akt的活化，将Akt—s

6、iRNA转染至hOB后可阻断Akt蛋白的表达；此外，Akt—siRNA，LY294002和HIM0均可阻断Omentin一1的促成骨细胞增殖的效应。结论：Omentin—l能通过P13K／Akt信号通路促进hOB增殖。关键词：Omentin一1；成骨细胞；增殖；P13K／Akt1I万方数据硕士学位论文中文摘要第二部分Ghrelin对OPG基因敲除小鼠动脉钙化的影响目的：Ghrelin是一种由28个氨基酸组成的多肽，在体内发挥着促进生长激素释放，刺激摄食，调节能量代谢等方面的作用。血管平滑肌细胞(VSMCs、)向成骨样细

7、胞分化是动脉钙化的细胞学基础和关键环节。我们前期的研究发现Ghrelin通过细胞外信号调节激酶／细胞核因子1(B受体活化因子配基(ERK／RANKL)和Akt／RANKL信号通路抑制小鼠VSMCs向成骨样细胞分化，本研究探讨Ghrelin对OPG基因敲除(OPG牛)小鼠动脉钙化的影响。方法：OPG4小鼠每两周经尾静脉注射Ghrelinadenovirus(Ad．Ghr)或13-galactosidaseadenovirus(Ad—Gal)或PBS，并分别分为Ghrelin组、阴性对照组及空白对照组，野生型(WT)tJ,

8、鼠每两周经尾静脉注射PBS作为WT组，8周后处死老鼠，。分离鼠胸主动脉，westernblot检测Ghrelin表达；茜素红染色及Vonkossa染色测定血管的钙化程度；分’．一。一。。离主动脉弓到髂骨分支的动脉，比色法测动脉血管壁钙含量，对硝基苯酚法测动脉血管壁碱性磷酸酶(ALP)活性；免疫组化检测动脉血管壁骨钙素(0C)、RA