ngal在脓毒症性急性肾损伤时的作用及肾脏保护性机制研究

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1、河北医科大学博士学位论文NGAL在脓毒症性急性肾损伤时的作用及肾脏保护性机制研究姓名：韩梅申请学位级别：博士专业：内科学指导教师：李英201204中文摘要NGAL在脓毒症性急性肾损伤时的作用及肾脏保护性机制研究摘要急性肾损伤(acutekidneyinjury,Am)，既往被称为急性肾衰竭，是指肾功能突然下降，但病程在3个月以内的一组临床综合症。研究显示，在危重症病人中AKI的发病率可达30．50％，而由脓毒症引发的AKI(sepsis．inducedAKIorsepticAKI)约占AKI总发病率的50％。SepticAKI病人具有更紧急的入院情况、更多的合并症和更高的危险评分，而且即使我们

2、治疗危重症的方法和支持手段在不断进步，septicAKI病人的死亡率仍然高达60％。SepticAKI病人的不良预后有着很多原因，首先是我们对septicAKI的病理生理机制尚不完全清楚，局限了我们对治疗方法的改进；此外在临床工作中，血清肌酐(serumcreatine，SCr)仍然是诊断和治疗AKI的检测指标，但它会受到肌肉质量、血压和饮食中蛋白质摄入量等诸多因素的影响，且与肾脏细胞的急性损伤间无明确的相关性。因此SCr并不是能够及时而准确的反应AKI的生物学标志物，不能使我们在AKI的初期就能做出诊断并及时的逆转肾细胞的损伤，我们需要寻找新的AKI的生物学标志物。在目前已确认的AKI的生物

3、学标志物中，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase．associatedlipocalin，NGAL)被认为是最为重要和理想的标志物。众多研究在造影剂相关性肾病和缺血／再灌性AKI(心脏术后AKI和‘肾移植术后AKI)病人中对NGAL的临床诊断价值进行了评价。显示NGAL是AKI良好的诊断标志物，其敏感性为0．815。近几年来，也有几项研究评价了NGAL对儿科或成人危重病病人septicAKI的诊断和预测价值。然而，NGAL作为septicAKI诊断标志物时出现了一些难以解释的问题，无论血清中的NGAL(serumNGAL，sNGAL)还是血浆中的NGAL(

4、plasmaNGAL，pNGAL)虽然具有很高的诊断敏感性，但是诊断的特异性却很低。而尿液中的NGAL(urinaryNGAL，uNGAL)显示了更好的诊断特异性，只在脓毒症合并AKI的病人中升高，在未合中文摘要并AKI的病人中并不升高。体液中NGAL在诊断AKI时出现的不确定性，为诊断和治疗AKI带来了困扰。因此，我们应该进一步研究septicAKI时肾脏NGAL的变化规律及与slpNGAL、uNGAL的关系，以能正确分析NGAL在临床检测AKI时表现出来的差异。目前，对于NGAL和肾组织内细胞损伤机制之间关系的研究还很有限，NGAL作为AKI的生物学标志物，是否能够及时反应肾组织细胞内损伤

5、机制的变化还不明确。对于septicAKI，NGAL与肾组织内炎症反应的关系应是首要的研究课题。此外，NGAL作为肾脏上皮细胞在脓毒症时表达增多的一个急性期蛋白，它在受损上皮细胞中的作用尚不明确，也值得进一步探讨。基于以往的研究资料，本研究通过制备和观察内毒素(1ipopolysaccharides，LPS)损伤所致的septicAKI大鼠模型，及应用LPS刺激的人肾近端小管上皮细胞系(HK．2)，从在体水平及细胞水平明确NGALmRNA的表达规律，并进一步观察了NGALmRNA与pNGAL、uNGAL、肿瘤坏死因子仅(tumornecrosisfactor，n师仪)、白介素．6(interl

6、eukin．6，IL．6)、细胞凋亡间的关系，为将NGAL更好的应用于临床septicAKI病人的诊断、治疗中提供了切实的理论依据。l内毒素致大鼠脓毒症性急性肾损伤模型的制备目的：采用适当剂量的LPS腹腔内注射致大鼠发生AKI，通过观察血肌酐水平和肾组织病理改变以明确肾损伤，为以后的实验研究提供科学而稳定的动物模型。方法：按照处理因素和时间的不同将大鼠分为6组，每组6只。对照组(Con)为盐水处理组，给予0．9％盐水(1m1)腹腔内注射；其余5组为LPS处理组，给予大鼠腹腔内注射LPS(3．5mg／kg)，分别处理l、3、6、12、24h，并按照处理时间设定为：LPSlh组、LPS3h组、LP

7、S6h组、LPS12h组、LPS24h组。实验各组按照预设时间点，采集血液标本以测定血肌酐水平，留取肾脏标本行光镜及电镜下病理组织学观察以明确肾损伤。结果：①SCr在LPS处理后3．12h升高，LPS3h、LPS6h、LPSl2h组与Con组相比有显著差异(P