mir-141对肝癌细胞huh7迁移和对hcv复制能力影响的机制研究

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1、分类号学号M201074862学校代码10487密级硕士学位论文miR-141对肝癌细胞Huh7迁移和对HCV复制能力影响的机制研究学位申请人：徐正红学科专业：病原生物学指导教师：杨红枚教授答辩日期：2012.12.25TheMechanismofHuh7MigrationandHCVReplicationAffectedbymiR-141Candidate:ZhenghongXuMajor:PathogenicBiologySupervisor:Prof.HongmeiYangHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074

2、,P.R.ChinaDecember25,2012独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编

3、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日ThisworkwassupportedbygrantsfromNationalNaturalScienceFoundationofChina（No.31070142）andHubeiMinistryofHealth（0216510069）toHYang华中科技大学硕士学位论文摘要目的：microRNA（miRNA）是一类非编码的单链小RNA分子，长度为18-22个核

4、苷酸，具有转录后调控基因表达的功能。研究表明，miRNA几乎在所有细胞的生物学过程包括代谢、生存、分化和凋亡中发挥着关键性的作用。特定miRNA的表达下调导致多种疾病，尤其是肿瘤的发生发展。我们及其他研究表明，在肝癌组织中miR-141表达明显下调，但其具体作用机制尚无报道，我们研究目的之一拟对肝癌细胞Huh7迁移能力是否受miR-141的调控进行初步探讨，以期提供肝癌转移的新标向，具有重要的研究意义。HCV的慢性感染容易导致肝硬化和肝癌，在中国，HCV感染率呈逐年上升趋势。据研究报道，不同的miRNA能促进或抑制病毒的复制，但miR-141对HCV复制的影响目前尚不清楚，我

5、们的研究目的之二拟探讨miR-141对HCV复制的影响及其机制，以期探索临床上治疗HCV感染的新靶点，具有重要的临床价值。方法：1．利用慢病毒载体感染Huh7，建立稳定高表达miR-141的Huh7-miR-141-LV及其阴性对照组Huh7-NC-LV；2.TranswellAssay检测miR-141在Huh7内高表达和被抑制后，对细胞迁移能力的影响；3.qRT-PCR检测miR-141在Huh7内高表达后对JFH1复制的影响；4.qRT-PCR及WesternBlot分别检测细胞TGF-β、TLR/IRF信号通路中相关分子及MMP2/MMP9在mRNA水平及蛋白质水平的

6、表达量；5.双荧光素酶报道基因检测IFN-βLuc的活性。结果：1.利用慢病毒载体感染成功建立了稳定高表达miR-141的Huh7-miR-141-LV。2.miR-141在Huh7中高表达后能显著抑制Huh7迁移，而被抑制后，Huh7的迁移能力上升,因此miR-141是影响Huh7迁移能力的一个重要的因素。3.在Huh7中高表达miR-141后，可通过降低其靶基因TGF-βR1的mRNA水平和蛋白质水平的表达量，阻断TGF-β信号通路，进而抑制Huh7的迁移能力；在Huh7中高表I华中科技大学硕士学位论文达miR-141后,还可降低MMP2和MMP9的表达量。4.miR-1

7、41在Huh7中高表达后能显著抑制HCV毒株JFH1的复制能力，并成时间依赖性。5.在JFH1感染Huh7-miR-141-LV后，可促进TLR/IRF信号途径中的TLR7、TLR9、IRF7的mRNA水平和IRF3的蛋白质水平。6.在JFH1感染前后，Huh7-miR-141-LV中IFN-βLuciferase的活性都比Huh7-NC-LV中强，因此miR-141可能通过促进TLR7、TLR9和IRF3、IRF7的表达，激活IFN-β启动子，从而抑制JFH1在Huh7中的复制能力。结论：1.miR-