mekerk信号传导通路在缺氧诱导的外层血-视网膜屏障损伤中的作用

《mekerk信号传导通路在缺氧诱导的外层血-视网膜屏障损伤中的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、博士学位论文密级——MEK／ERK信号传导通路在缺氧诱导的外层血．视网膜屏障损伤中的作用TheRoleofMEK／ERKsingnalingpathwayinHypoxia-InducedoBRBbreakdown作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：刘燕眼科学湘雅医院许雪亮教授论文答辩日期兰!!!：兰：岁答辩委员会主席中南大学二。一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材

2、料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：刻垒日期：三兰∑年二月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：三坦导师签名赴日期：垄断三月扛日博士学位论文中文摘要摘要第一章缺氧条件下ARPE．19细胞中MEK／ERK信号传导通路与细

3、胞间紧密连接蛋白的变化目的建立ARPE．19细胞缺氧模型，探讨缺氧条件下视网膜色素上皮细胞(retinapigmentepithelium，RPE)MEK／ERK信号传导通路与细胞间紧密连接蛋白的改变，以及影响紧密连接的血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的变化。方法ARPE一19细胞复苏后取对数生长期细胞，利用化学制剂二氯化钴(CoCl2)诱导其缺氧模型。将细胞培养于60x15mm细胞培养皿中，取6份细胞随机均分为缺氧组和正常对照组，缺氧组培养基中加入浓度为200I_tM的二氯化钻(CoCl2)，而正常对照组中加入等量的二甲

4、基亚砜(DMSO)。3小时后利用WestemBlot检测各组细胞中缺氧诱导因子(hypoxia—induciblefactor-let，HIF．1a)以明确细胞缺氧情况，之后以WesternBlot检测在缺氧环境下ARPE细胞中p-ERK／t．ERK的随时问变化曲线(每间隔0．5小时检测一次，共3小时)，24小时检测细胞间紧密连接蛋白之一的密封蛋白(occludin)的变化，并于3,6，12，24小时利用ELISA检测细胞培养液中细胞分泌的VEGF的时间变化曲线。结果CoCl2诱导的缺氧条件下，3小时检测HIF．1et明显增高，为正常对照组的1．57倍，差异有统计学意义(p<0．0

5、01)。缺氧条件下ARPE．19细胞中P．ERK蛋白表达量随时间推移，自1．5小时起较正常组逐渐增多，约于2．5小时时达到顶峰，随后逐渐回落，与正常组蛋白表达量相比，缺氧情况下高峰时p-ERK蛋白表达量增加了约4．12倍(p<0．001)。而t-ERK在缺氧及正常情况下总量不变(p>O．05)。缺氧组细胞问occludin蛋白的表达量较正常组减少了53．3％，差异有统计学意义(p

6、-23．98，；1294．62士11．15VS952．694-29．41；1820．314-49．68VS1587．154-54．57，统计学分析表明3小时前缺氧组与正常组VEGF的表达无统计学差异(p>0．05)；6，12，24小时缺氧组VEGF表达均较正常组增多，差异有统计学意义(p<0．01)。结论CoCl2诱导APRE．19细胞的缺氧模型是成功的。缺氧条件博士学位论文中文摘要下，ARPE．19细胞中的MEK／ERK信号传导通路被激活，密封蛋白occludin被破坏，而VEGF的表达增多。II博士学位论文中文摘要第二章阻断MEK／ERK信号传导通路对缺氧条件下ARPE一19细

7、胞间紧密连接的保护作用目的探讨阻断缺氧条件下ARPE．19细胞中MEK／ERK信号传导通路的激活对VEGF分泌的影响及细胞间紧密连接蛋白的保护作用。方法按第一章所述方法将同一批对数生长期ARPE一19细胞共12份，随机均分为缺氧组和正常组，两组中又分为MEK抑制剂PD98059干预组和DMSO对照组，分别于培养液中加入浓度为209M的PD98059及等量DMSO预干预1小时，每组重复3份。沿用上一章中各时间点，以Westernbolt检测各组细胞表达的P—ERK／t．