高糖作用下视网膜mülle细胞gs蛋白的表达变化及rhepo对其作用的影响

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1、青岛大学硕士学位论文高糖作用下视网膜mülle细胞GS蛋白的表达变化及rhEPO对其作用的影响姓名：阴杰平申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：孟岩20120522高糖作用下视网膜miiller细胞GS蛋白的表达变化及rhEPO对其作用的影响．摘要目的：观察体外培养大鼠视网膜miilMr细胞在高糖培养环境下谷氨酰胺合成酶(glutamaminesynthetase，GS)的表达变化；探讨重组人促红细胞生成素(recombinanthumanerythropoietin，rhEPO)对其表达的影响及作用机制。方法：取出生5．7天新生SD大鼠视网膜，经胰酶消化后

2、分离纯化视网膜miiller细胞。预实验用台盼蓝染色观察不同浓度葡萄糖对视网膜miiller细胞形态、生长状态及存活数的影响，确定高糖浓度。将视网膜miiller细胞随机分为6组：正常对照组、高糖培养组和不同浓度rhEPO处理高糖组，分别在高糖培养液中加入终浓度为5、10、20、40U／mlrhEPO。48h后TUNEL法检测rhEPO对高糖对视网膜miiller细胞的凋亡的影响，并通过免疫细胞化学方法半检测不同浓度rhEPO干预高糖作用下mfiller细胞GS蛋白的表达水平。。结果：1、经免疫细胞化学染色鉴定，所培养细胞大部分为视网膜miiller细胞。2、

3、TUN-EL法检测结果示：miiller细胞在高浓度葡萄糖条件下活性下降并出现大量凋亡细胞，rhEPO干预48h后，随着rhEPO浓度的增加凋亡细胞明显减少(尸．

4、浓度，可能间接抑制高浓度谷氨酸对神经节细胞的兴奋性毒性作用导致的细胞凋亡，从而保护视网膜功能的正常。硕士研究生阴杰平(眼科学)指导教师孟岩教授关键词：重组入促红细胞生成素；视网膜miiller细胞；谷氨酰胺合成酶；细胞凋亡ⅡChangesofglutamaminesynthetaseexpressionofCulturedRetinalmfillercellsindiabeticretinopathyandTheeffectsofrhEPOAbstractobjectiveToinvestigatetheeffectofrecombinanthumaneryt

5、hropoietin(rhEPO)onglutamaminesynthetase(GS)ratretinalmfillercellsinducedbyhighglucoseinvitroandthepossiblemechanism．MethodsRetinaofpostnatal1～3daySDratswasdissectedintocellsuspensionbyusingtrypsindigestion．TrypanbluestainingwasusedtOstudytheeffctsofdifferentconcentrationsofglucoseo

6、nthemorphology，growthandsurvivalstatusofretinalneurons．TheretinalmfillercellsofpostnatalSDratswererandomlydividedintocontrolgroup，highglucosegroup，andtreatmentgroupwithdifferentconcentrationsofrhEPO．Theretinalmiillercellsintreatmentgroupwereculturedinhi曲glucosemediumwith5、10、20、40U／

7、mlrhEPO．After48hours，theapoptosisofretinalmfillercellswereassayedbyusingTUNEL，andtheexpressionlevelsofGSproteinofmfillercellsweredetected而thsemi—quantitativeimmunocytochemistry．ResultsImmunocytochemicalstainingshowedthatmostofthecellsinvitropositiveforanti—GSantibodyresponses，thepur

8、ityofretinalmiiller