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时间:2018-05-08
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1、高糖诱导人肾间质成纤维细胞cmet的表达及黄芪对其的调节作用【摘要】 目的:体外研究高糖对人肾脏间质成纤维细胞cmet表达的影响,并观察黄芪药物血清对其的调节作用。 方法:体外培养人肾脏间质成纤维细胞,按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组。于作用后6、12、24、48和96h,采用逆转录聚合酶链反应方法检测cmet和转化生长因子β1(transforminggroRNA表达,蛋白印迹分析检测cmet蛋白的表达。制备含药血清,将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10%黄芪含药血清组,作
2、用24h和48h后,检测cmet蛋白和mRNA表达情况。 结果:与正常对照组比较,高糖组细胞培养12h时cmetmRNA表达增加(P<0.05),24h达高峰(P<0.01),之后表达逐渐下降;高糖组细胞培养24h时,TGFβ1的表达开始增加(P<0.05),96h达到高峰(P<0.01)。与高糖组以及对照血清组比较,黄芪含药血清可使细胞cmetmRNA和蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05)。 结论:高糖刺激早期诱导cmet表达,之后表达下降。黄芪
3、可以通过诱导cmet表达延缓糖尿病肾病的进展。【关键词】原癌基因蛋白质cmet;糖尿病肾病;黄芪;成纤维细胞;转化生长因子β1 Methods:Acellculturesystemofhumankidneyfibroblastsankidneyfibroblastsalcontrolgroup,highglucosegroupandmannitolgroup.ExpressionsofcmetandtransforminggroRNAserasechainreaction(RTPCR)andt
4、heexpressionsofcmetprotEinethodafter6,12,24,48and96hourculture.Thehumankidneyfibroblasts;theexpressionsofcmetmRNAandprotEInalcontrolgroup,expressionofcmetmRNAinthehighglucosegroupRNAalcontrolgroupafter24hourculture(P<0.05),arrivingatthepeakaf
5、ter96hourculture(P<0.01).Fortyeighthoursaftertreating,thelevelsofcmetmRNAandproteininfibroblastsetmRNAandproteininearlierperiod,andtheninhibittheexpressions.RadixAstragalicanupregulatetheexpressionsofcmetmRNAandproteinofhumankidneyfibroblasts,ayb
6、eoneofitsactionmechanismsindelayingtheprogressionofdiabeticnephropathy. Keyet;diabeticnephropathy;RadixAstragali;fibroblasts;transforminggroet是具有酪氨酸激酶活性的受体,与其相结合的配体是肝细胞生长因子(hepatocytegroet在器官发育的早期起着重要作用[1],并可以介导HGF的所有反应。研究发现糖尿病大鼠肾脏髓质有cmet表达[2],提示cmet与
7、糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)存在相关性。然而cmet参与DN发病的具体机制国内外尚未见有报道。因此本研究以DN主要靶细胞——肾脏间质成纤维细胞为研究对象,探讨cmet在肾间质细胞中活性的改变,及黄芪对其表达的影响,为临床治疗寻求理论依据。 1材料与方法 1.1主要药品和试剂TRIzol(Gibco公司)、莫洛尼氏鼠白血病病毒(Moloneymurineleukemiavirus,MMLV)逆转录酶(reversetranscriptase,RT)(Gibco公司
8、)、TaqDNA聚合酶(Promega公司)和羊抗人cmet多克隆抗体(RD公司)。黄芪注射液(上海福达制药有限公司,2ml/支,含黄芪皂苷成分4mg,相当于生药4g)、甘露醇(Sigma公司,生产批号为M4125)和葡萄糖(FisherScientific公司,生产批号为053037)。 1.2实验方法 1.2.1含药血清制备选体质量200g雄性SD大鼠2只,灌胃前禁食12h,1只予黄芪注射液[按黄芪皂苷2.4mg/(kg·d)计
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