降钙素基因相关肽在颌骨骨折愈合过程中对转化生长因子-β1的调控作用研究

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1、第三军医大学硕士学位论文降钙素基因相关肽在颌骨骨折愈合过程中对转化生长因子--β1的调控作用研究姓名：周燕申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：谭颖徽201205第三军医大学硕士学位论文降钙素基因相关肽在颔骨骨折愈合过程中对转化生长因子一p。的调控作用研究木摘要降钙素基因相关肽(Calcatoningenerelatedpeptide，CGRP)作为一种肽类神经递质，主要分布在代谢活跃的骨组织中，可调节骨细胞生长、分化、活性，从而调控骨折愈合过程，但是其具体调控机制目前尚不明确。同时研究发现转化生长因子．13(TGF一13)可同时刺激

2、间充质干细胞、软骨细胞和成骨细胞的增殖及分化，还可以诱导细胞外蛋白质的产生，在软骨形成期及骨形成改建期发挥十分重要的作用。目前已经发现TGF—D有五种不同结构为TGF．pl-5，骨折愈合过程中不同结构的TGF．p在不同时间到达表达峰值，发挥的调控作用也不相同。其中TGF—Dl的表达时间最长，TGF—pl与TGF—p2的比例约为4：1，TGF—pl也是目前研究的最多的一个亚结构。在颌骨骨折愈合过程中，降钙素基因相关肽是否通过对TGF．Bl的调控，促使骨折愈合?本实验在课题组以往工作的基础上，建立失下牙槽神经支配的下颌骨骨折模型，检测骨痂中CGR

3、P的分布，进而研究颌骨骨折愈合的骨痂中CGRP的改变对TGF．Bl的表达所产生的影响；体外细胞实验研究中，通过加入外源性CGRP培养成骨细胞，检测成骨细胞培养液中TGF—Bl的表达，研究对成骨细胞的调控作用。方法：细胞实验：观察CGRP对成骨细胞TGF—p1表达的影响。原代培养新生兔颅骨成骨细胞，对所培养的细胞进行形态学观察及碱性磷酸酶染色鉴定后，分别向细胞培养液中加入不同浓度的CGRP，分别在不同时间段进行处理，用MTT法检测成骨细胞生长活力，用western—blot检测成骨细胞中TGF—B1的蛋白表达。动物实验：实验建立失下牙槽神经下颌

4、骨骨折愈合实验组和单纯性下颌骨骨折愈合对照组的实验动物模型(每组各25只)。两组动物分别伤后于4d、7d、14d、21d、28d于耳缘静脉处空气栓塞致死，截取制备骨折处之骨痂，采用免疫组化方法对观察愈合情况，运用Western—blot法检测TGF．D1蛋白表达。结果：细胞实验结果：(1)原代培养并分离兔颅骨成骨细胞，进行碱性磷酸酶(ALP)染色}国家自然科学基金资助项目(30973334)第三军医大学硕士学位论文鉴定。(2)外源性地加入同一浓度的CGRP后随着时间的增加MTT值也呈增加趋势；(3)同一时间点做比较，随着CGRP浓度的不断增加

5、，MTT值也呈上升趋势，并且在48h和72h组，这种趋势愈加明显(P<0．05)。(4)Westernblot实验中随CGRP浓度的增加TGF．pl条带灰度显著升高，显示TGF—B1蛋白的表达逐渐增强(P

6、阳性染色，钙化并转变为新骨的软骨及其表面的成骨细胞，其中在14d时对照组TGF．D1呈强阳性染色，与实验组比较有表达差异(P

7、能力。(2)CGRP对成骨细胞的增殖具有促进作用。(3)骨折愈合过程中，失下牙槽神经实验组由于神经缺失所至的CGRP表达减少，导致TGF一131的表达降低，影响骨痂的正常愈合。(4)在骨痂生长过程中TGF—pl的表达量随着时间的增加而递增。关键词：降钙素基因相关肤；失下牙槽神经支配；转化生长因子一pl；颌骨骨折愈合；成骨细胞；6第三军医大学硕士学位论文TheEffectsofCGRPontheexpressionandActivityofTGF—D1intheHealingofMandibularFractureinRabbitsAbstra

8、ctCalcatoningenerelatedpeptide(CGRP)，asapeptideneurotransmittersismainlydistribute