转录因子tbx18在小鼠胚胎心脏发育中的表达及作用研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文转录因子Tbx18在小鼠胚胎心脏发育中的表达及作用研究姓名：蒲荻申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：佘强201205重庆医科大学硕士研究生学位论文转录因子Tbxl8在小鼠胚胎心脏发育中的表达及作用研究摘要T-box基因家族为脊椎动物心脏的正常发育所必须，对早期心脏谱系的确定有重要作用，并参与腔室、血管的分化及心脏传导系统的形成。转录因子Tbxl8是T-box家族的新成员，是新的祖细胞标记因子之一，具有诱导多向分化潜能，研究认为其主要负责心管后极的延伸，它标记的心脏祖细胞被称为第三心脏发育区心脏祖细胞

2、，对心脏的发育起重要作用。因此，明确转录因子Tbxl8胚胎在心脏发育过程中的时空定位、定量表达及其对心脏发育的作用，对进一步的功能研究具有重要意义。目的：检测Tbxl8在小鼠心脏发育过程中的时空定位定量表达模式；揭示Tbxl8在小鼠胚胎发育中的作用。方法：利用地高辛标记试剂盒标记并合成Tbxl8RNA探针，用原位杂交技术检测小鼠整体胚胎及整体心脏Tbxl8mRNA的表达，并对杂交后的结果进行切片分析。用荧光定量PCR检测小鼠胚胎期心脏mRNA的定量表达。用X．gal染色检测Tbxl8-Cre／Rosa26R／LacZ基因谱系示

3、踪模型小鼠的报告基因LacZ蛋白的表达。用体视镜观察Tbxl8Q刮m基因敲除模型小鼠胚胎的发育状况并用HE染色来观察该模型胚胎心脏发育受到的影响。结果：1．原位杂交结果显示：小鼠胚胎转录因子Tbxl8mRNA在重庆医科大学硕士研究生学位论文E9．5d主要在小鼠胚胎的前体心外膜表达；在E10．5d在小鼠胚胎的前体心外膜及心外膜均有表达；在E11．5d前体心外膜无表达，而在心外膜的表达增多；12．5d在小鼠胚胎期的心外膜明显表达，并逐渐定位于心内膜下的心肌细胞；大于E12．5d向心肌细胞分化表达的量逐渐增多。在E12．5d至E16

4、．5天mRNA的表达量逐渐增加，之后表达量逐渐下降，至出生时明显减少。2．荧光定量PCR结果显示：转录因子Tbxl8在E12．5d至E16．5d的胚胎表达量逐渐增多，大于E16．5d的胚胎表达量逐渐减少，出生时表达明显减少。3．X．gal染色显示：Tbxl8．Cre／Rosa26R／LacZ双杂基因谱系示踪模型在早期小鼠胚胎期心脏LacZ蛋白在在E9．5d主要位于胚胎心脏前体心外膜；E10．5d以后逐渐分化形成心外膜；E11．5主要在心外膜表达；而在大于E12．5d逐渐在心室、心房及窦角区等心脏组织中表达。4．用体视镜观察到T

5、bxl8臼“‰基因敲出小鼠胚胎整体长度变短，全身水肿。HE染色显示Tbxl8Q吖‰基因敲出小鼠心脏发育异常，表现为窦角区心肌化延迟和窦房结头部缺失等发育异常。结论：转录因子Tbxl8是小鼠胚胎期心脏前体心外膜祖细胞群的标志之一，其表达具有时空特异性，表现为由前体心外膜向心外膜逐渐迁移，并逐渐向心肌细胞分化，其在心脏的表达有逐渐增加又逐渐降低的过程；Tbxl8．Cre／Rosa26WLacZ基因谱系示踪模型小鼠揭示出Tbxl8在胚胎早期由前体心外膜向心外膜迁移，并在胚胎中晚期参与分化形成心房、心室及窦角区的心肌组织，说明其对心脏

6、的发育起重要4重庆医科大学硕士研究生学位论文作用；Tbxl8‰佗∞敲出模型小鼠在胚胎整体及胚胎心脏的发育都表现出现明显的异常，尤其是窦角区心肌化的延迟，说明Tbxl8为心脏发育不可缺少的转录因子。本阐明了Tbxl8在小鼠心脏发育过程中的时空表达及作用，能为研究其在心脏发育中的功能和机制提供依据。关键词转录因子Tbxl8，小鼠胚胎，心脏发育，原位杂交，基因谱系示踪模型THEEXPRESSIONSANDEFFECTOFTRANSCRIPTIONFACTORTBXl8INMICEEMBRYONICHEARTSDEVELOPMENTA

7、BSTRACTTheT．boxgenefamilymembersareessentialforthevertebratenonnalhe抓sdevelopment，theyhavegreatimportancefortheearlycardiaclineagedetermination，andtheyhavebeeninvolvedinthechamberspecificationanddiversificationofthespecializedconductionsysteminemb巧os．TranscriptionFa

8、ctorTbxl8isamemberoftheT-boxgenefamilyanditisanewsignsf．actorofprogenitorcells，ithasthepotentialitytoinducetheprogenitorcellsdifferentiati