补肾生髓成肝调控肝肾精虚大鼠肝再生的作用及机制研究

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1、湖北中医药大学硕士学位论文“补肾生髓成肝”调控肝肾精虚大鼠肝再生的作用及机制研究姓名：林立生申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：李瀚旻20120512摘要目的：通过观察体现“补肾生髓成肝’’治疗法则的院内制剂(鄂药制药字z20113160)对肝肾精虚／肝肾阴虚(MSG-肝再生一大鼠)模型肝再生的影响及机制，探讨“补肾生髓成肝"调控肝再生改善肝肾精虚证的生物学基础，揭示慢性乙型肝炎肝肾阴虚证的科学内涵和证候本质，明确“久病入肾"、“重病入肾”(慢性乙型肝炎肝肾阴虚证)的客观依据和量化考核指标，为临床采用骨髓干

2、细胞移植或“补肾生髓成肝"联合骨髓干细胞移植治疗肝衰竭提供实验依据，为慢性乙型肝炎肝肾阴虚证的客观化、标准化、规范化和提高临床疗效提供科学依据。方法：wiStar大鼠新生乳鼠于出生第2、4、6、8、10天时皮下注射左旋谷氨酸单钠一生理盐水溶液，剂量为每次4mg／g体重，生理盐水对照组大鼠皮下注射等体积医用生理盐水，PHx组大鼠不作处理。28天后离乳，6周时随机分为PHx组、生理盐水对照组、假手术组、模型组和补肾生髓成肝组，补肾生髓成肝组大鼠按39／kg剂量给予院内制剂(鄂药制药字Z20113160)灌胃，其余各组给予等

3、量生理盐水灌胃。连续给药两周后行肝大部分切除术切除肝脏左叶和中叶，假手术组翻动肝脏不切除。术后继续给药，在术后1天、3天、7天、10天时分别分析肝再生度、肝再生指数(％)和肝细胞分裂指数MI变化，观察外周血红细胞计数和血红蛋白含量，分析骨髓单个核细胞CD34／CD45双阳性率的变化，观察肝组织CD34表达情况，观察肝组织和垂体纤维粘连蛋白FN的表达。病理切片拍照后用ImagePro-Plus6．0软件进行图像处理，选定分析区域，获取平均光密度值MOD。所有数据均利用统计软件SPSSl9．5中文版处理，多个样本均数的组间

4、比较采用多因素方差分析，根据软件统计结果绘制图表。结果：肝肾精虚大鼠肝再生过程严重失调，表现为术后第1天肝再生亢进，肝再生度(0．34±0．10)显著高于PHx组(0．224-0．08)和生理盐水对照组(0．21±0．05)，再生指数(1．884-0．14)高于PHx组(1．464-0．13)和生理盐水对照组(1．474-0．18)、低于MSG一假手术组(3．404-0．儿)，肝细胞分裂指数MI(1．05±0．12)高于PHx组(0．86±0．16)和生理盐水对照组(O．87±0．16o中晚期肝再生过程则受到显著抑制，

5、术后第3、7和10天的肝再生度分别为0．42±o．08、0．57±0．12、0．70±O．08，低于PHx组和生理盐水对照组；肝再生指数分别为2．07±0．04、2．41±0．06、2．84±0．10，低于PHx组、生理盐水对照组和MSG-假手术组；M1分别为1．04±0．18、0．41土O．16、0．15±0．03，明显低于PHx组和生理盐水对照组。最终模型组大鼠在肝再生度、再生指数和肝细胞分裂指数等方面均低于其它各组，不能恢复到正常水平。经“补肾生髓成肝"的院内制剂(鄂药制药字z20113160)治疗后，模型大鼠肝

6、再生紊乱情况得到一定纠正。术后第1天肝再生度(0．13±O．07)低于模型组(0．34±O．10)和PHx组(O．22±0．08)，肝再生指数(1．52±0．11)显著低于模型组(1．88±0．14)，肝细胞分裂指数MI(0．77士0．14)低于模型组(1．054-O．12)，说明模型大鼠在肝再生早期的异常亢进被抑制。术后第3、7和10天补肾生髓成肝成肝组大鼠肝再生度分别为0．50±0．05、0．74±O．06、O．86-4-O．03，与模型组比较显著升高；肝再生指数分别为2．19±0．11、2．84±O．12、3．2

7、7±O．06，高于模型组；肝细胞分裂指数分别为1．89土0．13、0．57±0．20、O．28±0．04，显著高于模型组。外周血红细胞RBC计数和血红蛋白Hb含量结果显示，MSG-假手术组显著低于生理盐水组，模型组显著低于MSG-假手术组，经“补肾生髓成肝’’方药治疗，补肾生髓成肝组外周血RBC计数、Hb含量恢复正常。流式细胞术分析结果显示，术后l天、3天、7天、10天，模型组大鼠骨髓细胞中CD34／CD45双阳性细胞率低于PHx组和生理盐水对照组，差异具有显著性，P<0．05。给予“补肾生髓成肝"方药治疗，补肾生髓成

8、肝组大鼠骨髓C034／CD45双阳性细胞率明显增加，在术后3天、7天、1o天均显著高于模型组，差异具有显著性，P<0．05。实验大鼠肝组织CD34的表达与骨髓CD34／CD45双阳性细胞率的变化趋势一致，术后1天、3天、7天、10天时模型组大鼠肝组织CD34的表达低于PHx组和生理盐水对照组，差异具有显著性，P<0．05；补肾生髓