松材线虫威海群体的发生特点、病原鉴定及药剂毒杀行为研究

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1、山东农业大学硕士学位论文松材线虫威海群体的发生特点、病原鉴定及药剂毒杀行为研究姓名：谭晴晴申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：吴海燕；姜淑霞20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要2010年3月．10月对山东省威海市成山林场的松材线虫病发生进行调查，检测其树体内松材线虫的时空动态、分布状况；通过对雌雄成虫的永久玻片和临时玻片的光学显微镜观察、测量和显微镜拍照，对山东省威海成山、烟台长岛和淄博鲁山3个线虫群体形态学和分子生物学鉴定；为了有效的筛选防治松材线虫病药剂，采用生物浸渍法，

2、利用校正死亡率和运动行为量化指标综合评价甲维盐、硫酸铜和苦参碱对Bursaphelenchusxylophilus室内毒力试验结果；同时，研究了甲醇、无水乙醇、丙酮和二甲基亚砜等4种常见溶剂的处理对松材线虫运动行为的影响，为研究杀线剂过程中原药的配制和植物提取液溶剂的使用提供重要的生物学信息。本研究获得结果如下：1．山东省威海市成山林场松材线虫群体消长动态规律2010年3月一10月对山东省威海市成山林场的松材线虫病发生进行监测。结果发现，7月一lO月松材线虫的发生达到高峰期，树皮内松材线虫的数量

3、明显高于树体其他部位。病木树皮内松材线虫的数量，树梢明显高于基部，树中下部是最少的；病树上松材线虫在距离地面O．1．2m及4．0-4．8m处松材线虫的数量明显的高于其他部位的数量，其他部位松材线虫的数量没有显著的差异；树体的不同方位松材线虫数量不同。2．山东省威海、烟台、淄博3个群体线虫的形态学和分子生物学鉴定威海成山、烟台长岛和淄博鲁山3个线虫群体共同的形态特征为：雌雄虫呈蠕虫形，虫体细长。唇区高，缢缩显著。口针比模式种稍短，基部微增厚。中食道球卵圆形，占体宽的2／3，瓣膜明显。阴门位于虫体中

4、后部大约75％处，上面覆以宽的阴门盖。雄虫的交合刺大，弓状，成对，喙突显著，远端膨大如盘。3个群体的形态区别为：威海成山和烟台长岛群体的线虫雌虫的尾部呈宽圆形，无尾尖突；雄虫尾部像腹部弯曲，无交合伞包被。淄博鲁山群体雌虫尾部有极短的尾尖突，雄虫尾部端生卵形交合伞。利用特异引物PCR扩增和ITS．RFLP技术，并通过5种限制性内切酶酶切和同源性序列比对。鉴定3个群体线虫均为松材线虫Bursaphelenchusxylophilus(Steiner&Buhrer,1934)Niekle，1970)。

5、3．药剂和溶剂处理对松材线虫运动行为的影响供试药剂处理线虫后，随着暴露时间的延长W溘值逐渐降低，硫酸铜和甲维盐分别在浓度为100m朗处理8h和浓度为2m鲫处理2h时只有极少数的线虫仅头尾部微弱的摆动，其他的线虫均丧失活性。苦参碱在1000mg／l处理8h时线虫的活性降低，I松材线虫的发生动态、群体鉴定及药剂毒杀行为研究虽然都有活性，但90％身体卷曲，只有1／2线虫头尾部摆动缓慢。甲醇、无水乙醇、二甲基亚砜、丙酮在l％浓度下处理不同的时间，线虫W姨值发生一定变化，但不显著，3％时，行为变化明显(P

6、

7、，0．2068，0．0369和0．0354mg／l。关键词：松材线虫；鉴定；山东省；毒力测定；运动行为H山东农业大学硕士学位论文respectively．Keyword：Bursaphelenchusxylophilus；Identification；Mortality；MovementBehavior；ShandongprovinceV山东农业大学硕士学位论文1．刖舌线虫(nematode)是一类低等的无脊椎动物，据保守统计，全世界线虫种类要超过50万种，10％为植物线虫(段玉玺等，2011)

8、。目前世界上已记载的植物线虫约有200多属5000种，每年都有新种发表(谢辉，2000)。植物寄生线虫是农作物、蔬菜、果树、树木和花卉以及药材上重要的病原物之一。全世界每年被线虫危害的粮食和纤维植物造成的损失大约为12％，给果树和蔬菜造成的损失超过20％(刘维志等，2000)。松材线虫病(PineWoodNematodeDisease，PWND)主要是由松材线虫Bursaphelenchusxylophilus(Steiner&Buhrer,1934)Nickle，1970弓1起，是松树的一种毁