松材线虫的形态学观察及细菌对松材线虫表达的影响

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1、分类号：Q936密级：UDC：579.82学校代码：11065硕士学位论文松材线虫的形态学观察及细菌对松材线虫表达的影响林璐璐指导教师李荣贵学科专业名称微生物学论文答辩日期2015年6月6日松材线虫的形态学观察及细菌对松材线虫表达的影响摘要松萎蔫病（PineWiltDisease）是由松材线虫[Bursaphelenchusxylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle]引起一种松树的毁灭性病害。近年来越来越多的研究表明，松材线虫携带的细菌在松萎蔫病的病理进程中发挥着重要作用，松萎蔫病是由松材线虫与伴生细菌两

2、种病原共同作用引起的病害。因此，深入开展松萎蔫病病原的检测及两种病原间协同作用研究，对于揭示松萎蔫病的致病机理具有重要的意义，同时也为松萎蔫病的防治奠定理论基础。本文研究了4种染色剂对松材线虫的染色效果，结果表明，虎红和水溶性苯胺兰对松材线虫的染色效果好，虫体全身着色且着色较深，而亚甲基蓝和结晶紫对松材线虫的染色能力较弱，只在头部和尾部着色明显。此外，本文初步研究了刀豆凝集素、麦胚凝集素和花生凝集素对松材线虫的作用，结果显示，植物凝集素处理后，松材线虫初期均表现出活动加强、幅度增大，部分线虫身体卷曲呈“S”状或“8”字状，部分

3、线虫出现聚集现象，随着处理时间的延长，松材线虫的死亡率逐渐上升，4.0mg/mL的刀豆凝集素、麦胚凝集素和花生凝集素分别处理10min，松材线虫的死亡率分别为100%、80%和65%。该研究为松材线虫的形态观察及防治提供了参考。为深入了解松材线虫携带菌在松萎蔫病中的作用，本文在转录组水平上研究了松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A对无菌松材线虫基因表达的影响，结果显示，与无菌松材线虫相比，携带荧光假单胞菌GcM5-1A的松材线虫有178个基因表达出现差异，经无参的BLAST比对发现有68个基因在数据库中存在相似基因，在这个

4、68个差异基因中有统计学意义的有6个，这6个基因中5基因呈上调表达，1个基因呈下调表达。5个上调表达的基因分别是lys-2（编码溶菌酶）、sodh-1（编码乙醇脱氢酶）、LOC100631470（编码丙酮酸脱氢酶E1β亚基编码基因）、PhyH(编码植烷酰辅酶A双加氧酶)和cyp-42A1（编码细胞色素P450家族蛋白），1个下调的基因是sft-4,编码SFT-4蛋白。定量RT-PCR分析证实，携带荧光假单胞菌GcM5-1A后松材线虫的LOC100631470表达水平是无菌松材线虫的3.02倍，sodh-1的表达水平是无菌松材线

5、虫的2.65倍，而sft-4的表达水平是无菌松材线虫的0.36倍,这与转录组学的分析结果一致，本研究为深入了解松材线虫与其携带细菌的协同致病机理提供了理论参考。关键词：松材线虫；染色；凝集素；基因表达MorphologicalObservationandEffectofAssociatedBacteriaonGeneExpressionofBursaphelenchusxylophilusAbstractPinewiltdisease（PWD）whichiscausedbypinewoodnematode（PWN），Bursa

6、phelenchusxylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle,isadevastatingdiseaseofpinetrees.Inrecentyears,moreandmoreresearchesindicatethatbacteriacarriedbyPWNplayanimportantroleinpathogenesisofPWD,andPWDisacomplexdiseasecausedbybothPWNanditsassociatedbacteria.Therefore,futurestudi

7、esonthedetectionofpathogensofPWDandsynergisticeffectofthesetwopathogensareurgentinordertoelucidatethemechanismofPWDandlayatheoreticalfoundationforpreventionofthisdisease.Inthispaper,fourdyeswerestudiedfortheirstainingeffectsonPWN.Theresultsshowedthatrosebengalandwat

8、er-solubleanilinebluehadmuchbetterstainingeffectsonPWNthanmethyleneblueandcrystalviolet,whichcouldstainthewholebodyofPWN.Methyleneblueandc