松材线虫的早期诊断、快速检测技术及松材线虫与拟松材线虫的差异蛋白质组研究

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1、松材线虫的早期诊断、快速检测技术及松材线虫与拟松材线虫的差异蛋白质组研究摘要松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)是松材线虫病的病原，它是包括我国在内的许多国家重要的林业病害，也是许多国家的重要检疫对象，在我国属于二级检疫对象，每年造成的生态与经济损失难以估计。但是因为它和致病性弱的拟松材线虫佃．mucronatus)在形态上极其相似，在显微镜下难以区分，这给松材线虫的检疫和防治带来了很大的困难。本研究着眼于对松材线虫的快速检测和早期诊断技术进行改进与完善，建立了适用于松材线虫的口岸

2、检疫、林木防疫与监测的体系与方法；并开展了松材线虫与拟松材线虫的差异蛋白质组研究。本研究建立了基于快速分离器与分子检测方法的松材线虫快速检测体系，最快可以在90min内完成从样品分离到得到鉴定结果的全过程，快速灵敏高效，大大缩短了检验检疫所需的时间，适合口岸快速通关的需要；基于松材线虫病早期检测管与Y型等长双链探针．实时荧光PCR快速检测技术的松材线虫病早期诊断体系，可以有效、及早地发现还处于感染早期尚未出现明显病症的松木，有利于及时清除传染源，防止疫情扩散；建立了应用荧光PCR技术检测松墨天牛所携带的线虫

3、情况的体系与方法，因而使在诱捕松墨天牛并调查其所携带线虫情况时所遇到的虫体腐烂而难以鉴定的难题得到解决；首次运用双向电泳与MALDI．TOF．MS／MS蛋白质组学手段，对松材线虫和拟松材线虫的差异蛋白质组进行研究，研究认为两种线虫在代谢途径、信号调控机制和胞质转运机制上都存在着一定差异，支持松材线虫是唯一病原病的理论，并对松材线虫的致病机理进行了初步探讨。该研究也为进一步的松材线虫血清学检测鉴定和致病机理研究打下基础。关键词：松材线虫；检测；差异蛋白质组厦门大学2008年硕士学位论文AbstractPine

4、wiltdiseaseisoneofthemostimportantpinetreediseases，anditscausalagentispinewoodnematode(Bursaphelenchusxylophilus，PWN)whichisagreatthreattothepineforestsofmanycountriesandhascausedgreateconomiclosseveryyearaswellasimponderableecologicaldamage．Thus，B．xylophi

5、lusisaquarantineorganismatthetopofthelistofthepathogenicspeciesinmanycountries，andalsolistedonA2inChina．However,itisdifficulttodifferentiateB．xylophilusfromtheclosely—relatedspeciesB．mucronatus，whichisnotpathogenictopinetreesundermicroscopefortheirmorpholo

6、gicalsimilarity,whichmakesthequarantineandpreventionverydifficulttoperform．Inthisstudy,wefocusedontheimprovementoftherapiddetectionandearlydiagonosistechniquesofB．xylophilus，anddevelopedseveralapplicationsystemsandmethodsforportquarantineandpineforestmanag

7、ement．WealsocarriedondifferentialproteomeanalysisofB．xylophilusandB．mucronatus．UsingtheRapidIsolatingMachineandmoleculardetectionmethods，anapplicationsystemforrapiddetectionofpinewoodnematodesWaSdeveloped，whichtookonly90mintogothroughthewholeprocedurefromn

8、ematodesamplecollectingtothefinalidentificationresult．Thisspecificandsensitivesystemwouldgreatlysavequarantinedetectiontimeandsavetheclearancedelayforcargoes．Combiningearlydiagnosistubeandequal··lengthdouble—