曼氏裂头蚴感染诊断的病原鉴定方法研究

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1、分类号UDC密级编号十南大学CENTRALSOUTHUNⅣERSITY硕士学位论文论文题目：学科专业：研究生姓名：指导教师：曼氏裂头蚴感染诊断的病原鉴定方法研究病原生物学贺美曾庆仁教授中南大学二。一二年十月分类号UDC硕士学位论文密级舢舢圳㈣圳ⅢⅢ洲

2、iIff川Y2423793曼氏裂头蚴感染诊断的病原鉴定方法研究SmdyOnPathogenIdentificationMethodsOfSparganumMansoniInfectionDiagnosis作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期塑兰：!!：竺贺美病原生物学基础医学院曾庆仁教授

3、■。答辩委员会主席塑中南大学二O一二年十月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。作者签名：—鱼塞学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文

4、；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：垫量导师签名翰期：丝年旦月丛日课题基金资助中央高校基金前沿研究计划中南大学重点项目资助(2010QZZD027)摘要【目的】系统观察和分析曼氏裂头蚴的解剖组织学和组织病理学用以补充对该病原诊断基础的不足；探索检测切片中曼氏裂头蚴抗原和基因的方法用以解决病理切片中不能确定虫种的鉴定技术问题。【方法】收集来自青蛙和病人的曼氏裂头蚴标本42个、来自动物的其他蠕虫标本13个和人体组织标本2个。用倒置显微镜比较观察裂头蚴各部位的解剖结构组织学特征；福尔马林固定和石蜡包埋的曼氏裂头蚴切片标本，对HE染色的虫体

5、不同部位组织学进行比较观察；制各曼氏裂头蚴免疫血清，用间接酶免疫组化法比较检测不同虫种切片组织中抗原；设计作曼氏裂头蚴mtDNACOXl基因部分片断检测的引物4对，用商品化试剂分别提取数种蠕虫基因组DNA作PCR，取扩增产物经电泳观察目的条带，并测序，用blast软件分析其与已知基因序列的符合率。【结果】曼氏裂头蚴显微解剖组织学特征为：头部吸槽内具囊腔；体壁具凹凸横皱褶；体内实质呈网状纤维结构，富含石灰小体，在体中后部可见排泄小管；从虫体划破处可见有大量的呈圆形或椭圆形、无细胞结构的强折光盘状体溢出，即石灰小体，其个体明显比体细胞大。曼氏裂头蚴组织病理学特

6、征为：可因切取部位不同而有差异：头部形态最不规则，其横切面可见囊腔和成石灰小体；体部和尾部断面较大；体部的不同切面在组织结构上有差异；除头部外，虫体各断面的共同特征为体壁具凹凸不等的横皱褶，皮层较厚呈嗜伊红深染，有的皮层外可见长短不一微毛，体内为网状疏松的实质组织，无体腔和消化器官结构，可见分散的肌纤维和圆形，椭圆形或不规则形石灰小体，亦可见排泄管腔；在病理切片9例中有5例在虫体组织内未见典型的网状结构(呈钙化变性)，石灰小体和肌纤维束结构不典型。用酶免疫组化法最佳条件，对已知并殖吸虫、猪囊尾蚴和曼氏裂头蚴的组织切片检测均未出现假阴性和假阳性，对12例临床

7、来源的病理切片中裂头蚴检测均呈阳性反应。在基因扩增用的4对引物中，有两对(F650／R800和F965／R1120)可检出曼氏裂头蚴特异性目的条带。【结论】本研究描述的曼氏裂头蚴显微解剖组织学特征与其观察方法为病理学对石蜡包埋前虫体鉴定提供了简捷手段；系统观察和阐硕士学位论文摘要述的裂头蚴组织病理学特征为病理学观察提供了参考依据；探索检测曼氏裂头蚴特异性抗原和基因的方法为病理切片中疑似虫体鉴定提供了技术。关键词：曼氏裂头蚴，病原诊断，解剖组织学，组织病理学，免疫组化，基因鉴定硕士学位论文ABSTRACTABSTRACTObjective：7roobserv

8、eandanalysisthemo印h0109icalcharacteristicsofanatomyhistologyandtissuepathologyof．跏以，墨y，z“m所以，zsD，zf(S研)systematicallyforsupplementtheinsu所cientbasicknowledgeof1[11epa_thogendiagnosis．Tostlldyonthemethodsdetectingspecificantigensandgenesin＆msectionsinordertosolVethetechnicalproblem

9、softhep撇siteiderltification．Metho