大鼠骨髓神经组织定向干细胞的分离培养及其移植到大鼠脑缺血模型的初步探索

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1、重庆医科大学硕士学位论文大鼠骨髓神经组织定向干细胞的分离培养及其移植到大鼠脑缺血模型的初步探索姓名：李琳申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：郑敏201205重庆医科大学硕士研究生学位论文大鼠骨髓神经组织定向干细胞的分离培养及其移植到大鼠脑缺血模型的初步探索摘要目的：培养骨髓神经组织定向干细胞(neuraltissuecommittedstemcells，NTCSCs)，观察NTCSCs经静脉移植后在脑缺血大鼠脑内的分布和分化情况。方法：采用DMEM／F12(1：1)无血清神经干细胞条件培养基，从大鼠骨髓中分离、培养克隆生长的神经组织定向干细胞

2、(neuraltissuecommittedstemcells，NTCSCs)，应用免疫细胞化学对NTCSCs及其分化进行鉴定，利用I弭PCR检测NestiIl、CxCR4、CD31、B—III—tubulin、GFAPmRNA表达。采用改良ze卜Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCA0)模型，造模成功24h后经尾静脉注射1mlDAPI标记的NTCSCs。移植后第l、3、5、7d处死大鼠，制备脑组织冰冻切片，荧光显微镜下观察NTCSCs在脑组织的分布，激光共聚焦显微镜下观察NTCSCs的分化。结果：分离培养获得的NTCScs在神经干细胞培养条件下能形成神经

3、球，并表达神经干细胞标志巢蛋白Nestin及SDF．1受体CxCR4，能分化成p．III—tubulin、GFAP阳性细胞；ImPCR检测结果显示NTCSCs表达Nestin、CXCR4、CD31、p-III-tllbulin、GFAPmI酬A；静脉移植NTCSCs能够进入大鼠脑内，移植后3天观察到DAPI标记的NTCSCs————————型墅塑堕燮墼主要分布在缺血损伤部位，7天时有少量NTcscs分化为GFAP阳性细胞结论：分离培养的NTcscs具有神经干细胞特性，移植后NTcscs能进入缺血脑组织，部分细胞表达GFAP。关键词：骨髓神经组织定向干细胞：移植

4、：大脑中动脉栓塞CULTUREoFRATBoNEmRRoWDERIVEDNEURALTISSUECoMMITTEDSTEMCELLANDSTUDYoNIT，STANSPLANTATIoNINISCHEMIARATMoDELABSTRACTObjectiVe：TbinVestigatethedistributionanddi髓rentiationofneuraltissuec呦ittedstemcellsbyVeintransplantati。ninmiddlecerebralarteryocclusion．Methods：MonocytewerecolleCt

5、ed舶mbonemarrowandculmredinDMEM／F12se姗舶emediuIIlplusEGF、bFGF、2％B27togetNeuraltlssuecommlttedstemcells(NTCSCs)．ExpressionofNestinofNTCSCs，wereidenti6edbyimmuIlocytocheIIlisny．nledi航rentiationwerechecked．Modi丘edzea-LongasumremethodwereusedtOmakemiddlecerebral斫e巧occlusion(MCAO)model．The

6、NTCSCswerelabeledbvDAPIandwere1qectedthrou曲caudalVeiIlofrats；Atl，3，5，7daysa疗erinjectionratsweresacnficedandthebriantissueof打aIlsplalltation乒oupwerepreparedas抒ozensection．Thedis仃ibutionoftraIlsplalltedNTCSCswasobserVedunderfluorescentmicroscopeandmedi虢—entiationoftransplantedNTCSCswe

7、reobservedunderlaserconfocalmicroscopyaRerimmunonuorescemstaining．4重庆医科大学硕士研究生学位论文ResuIts：TheculturedNTCSCfomedNSCspheresinNscculturemediumandexpressedNestinandCXCR4atprotein1evel；R正PCRshowedNTCSCsexpressedNestin、CXCR4、CD31、p—III一劬ulin、GFAPmRNA：ARertransplantationtheDAPIlabelledNTCS

8、Cscouldbeobservedjn