台湾华人法布里病分子遗传学研究

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1、中国医科大学博士学位论文台湾华人法布里病分子遗传学研究姓名：载昌隆申请学位级别：博士专业：皮肤病与性病学指导教师：陈洪铎201205·中文论著摘要·台湾华人法布里病分子遗传学研究吉智言刖置法布里病(Fabrydisease，FD，OMIM301500)是一种X连锁遗传疾病，因X染色体上编码小半乳糖苷酶A(a-galaetosidase，a-GalA)基因(GLA，OMIM300644)突变，溶酶体内缺乏a—GalA活性，导致神经酞胺三聚己糖苷(globolriaoslycerarnide，Ob3)为主的大量代谢物无法分解，堆积于细胞内，造成多器官系统损害的综合征。临床表现

2、分为典型FD及非典型FD二类，典型FD以弥漫性角化性血管瘤、少汗，阵发性外周神经痛等症状为主，常在幼年发病；非典型FD则分为心脏、肾脏和神经三个变异型，常在中年后才发病，其中FD心脏变异型(Fabrydiseaseatypicalcardiacvariant)临床表现为肥厚性心肌病，尤其是左心室肥厚，多数患者携带WS4+919G>A基因突变(FD心脏变异型基因突变)。本研究通过测定新生儿干燥血点(“edbloodspot，DBS)a．GalA酶活性值结合后续GLA基因测序确定方法来进行新生儿FD及可疑FD家族成员筛检工作。此外，我们还对原诊断为特发性肥厚型心肌病(idio

3、pathichypertrophiccardiomyopathy，IHCM)的患者进行了WS4+919G>A基因突变检测。由于女性杂合子或ⅣS4+919G>A基因突变携带者的a-GalA酶活性减低不明显，临床症状轻微，因此采用测定a-GalA酶值方法往往不足以筛查此类人群。由此，本研究首次采用了高分辨熔解曲线分析技术啦ghresolutionmeltinganalysis，HRM)取代传统a-GalA酶值测定方法筛查女性杂合子或WS4+919G>A基因突变携带者，以探索其在筛查此类人群中的应用价值。对于FD基因突变携带者，是否该启动早期治疗目前尚有争议。以往认为Gb3与疾

4、病进展和病情严重程度相关，但后来研究发现，FD患者，FD半合子或杂合子临床症状和血浆或尿液中Cm3含量无绝对平行关系，而与血浆或尿液中鞘氨醇三聚己糖苷(globotriaosylsphingosine，lysoGb3)含量呈正相关。由此，本论文通过检测FD典型及心脏病变异型患者病情进展中及治疗前后血浆lysoGb3和Gb3水平，发现lysoGb3比Gb3更有临床相关性，提示血浆lysoGb3水平可用于指导酶补充疗法(enzymereplacementtherapy，ERT)的启动时机。研究对象和方法一、研究对象’(一)新生儿筛查、FD新生儿家族成员及门诊1HCM病患检查l

5、、台湾自2008年1月至2011年6月出生的352，581名新生儿，男184，045名，女168，536名。2、FD新生儿家族中家庭成员经筛查后，具任一种基因突变携带者或FD患者共253位，男54位，女199位。3、心脏内科门诊288位诊断为IHCM患者，男198位，女90位。(二)高分辨熔解曲线分析技术(HRM)进行GLA基因突变检测由上述(一)研究筛选出的140位确诊为FD新生儿(男121位，女19位)，进行HRM分析。13位正常人作为对照。(三)血浆lysoGb3和Gb3检测153位成年FD突变基因携带者，包括IVS4+919G>A突变携带者92人(包括典型临床症状

6、男性18位，前期临床症状男性27位，临床症状女性16位和前期临床症状女性31位)，20位典型FD基因突变携带者(男性8位，女性12位)和41位新型基因突变携带者(男性19位，女性22位)。33位正常人作为对照。二、研究方法’(一)新生儿筛查、FD新生儿家族成员及门诊IHCM病患检查l、新生儿筛查：下列(1H4)，共4项检查，2、FD确诊新生儿的家族成员检查：下列(2H8)，共7项检查。3、门诊中IHCM病人检查：下列(2)一8)，共7项检查。·(1)DBS双步骤检测。(2)a-GalA酶测定。(3)IVS4+919G>A突变基因检查。，(4)GLA基因测序。2(5)心脏科

7、超声，心电图检查。(6)肾脏科尿蛋白及肌酸酐检查。(7)眼科检查。(8)皮肤科检查。(二)HRM进行GLA异常基因检测1、flDBS中，提取DNA。2、使用RocheLightCycler480system(Roche，USA)分出l髓外显子～尹外显子及Ⅳs4的异常曲线。(三)血浆lysoGb3和Gb3检测1、以高效液相色谱法串联质谱仪，测量lysoGb3和Gb3。2、统计方法：两组间差异使用学生t_检验进行评估。相关关系则以斯皮尔曼等级相关系数测试。当P值<0．05时，认为有统计学意义。馇蟹二日禾一、新生儿筛查结果1、经DB