tl1a在实验性结肠炎相关肠纤维化发生中的作用

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1、河北医科大学博士学位论文TL1A在实验性结肠炎相关肠纤维化发生中的作用姓名：李辉申请学位级别：博士专业：内科学指导教师：张晓岚201204中文摘要TLlA在实验性结肠炎相关肠纤维化发生中的作用摘要肠纤维化是炎症性肠病(inflammatoryboweldisease，roD)发病过程中一种常见的严重并发症，最终可导致肠腔狭窄甚至肠梗阻发生。由于其发病机制尚未明确，迄今尚无理想治疗方案。因此，深入研究IBD相关肠纤维化的发病机制可能为临床治疗肠纤维化提供新的理论和实验依据。肠纤维化的发生是一个复杂动态的过程，主要由于免

2、疫反应失衡，肠道细胞因子如：转化生长因子(transforminggrowthfactor-13，TGF一13)、胰岛素样生长因子(insulin．1ikegrowthfactors，IGFs)和血小板衍生生长因子(platelet．derivedgrowthfactor，PDGF)等表达发生改变，进而促进以胶原为主的细胞外间质(extracellularmatrix，ECM)过度沉积所致。肠成纤维细胞被认为是肠纤维化发生的关键效应细胞。已有研究证实，肠成纤维细胞(intestinalfibroblasts，IFBs

3、)、效应细胞在上述细胞因子作用下活化，自身发生向肠肌成纤维细胞(intestinalmyofibroblasts，IMPs)转化，其增殖、迁移以及合成与分泌ECM的功能增强，ECM在肠壁大量沉积，最终导致肠纤维化和狭窄形成。由于慢性炎症的持续存在，肠道间质细胞分泌的胶原代谢酶调节平衡发生紊乱，主要包括基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)和组织金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitorofmetalloproteinases，TIMPs)，这些酶作用失衡导致ECM合成明显多

4、于降解，最终导致肠纤维化形成。有研究表明，在IBD发病过程中，M]V[Ps和TIMPs调节胶原代谢的功能失衡。同时，各种细胞因子改变间质细胞生物学行为离不开细胞内信号转导通路的调节。TGF．131／Smad3信号通路在纤维化过程中是一条最主要的信号传导通路。有研究证实，肠纤维化发生过程中TGF．I]l／Smad3表达与功能明显上调，由其调节的间质细胞活化亦增强。因此，探讨促纤维化因子及其信号通路在肠纤维化中的作用对研究其发病机制具有重要意义。肿瘤坏死因子样配体1A(tumornecrosisfactor-likeli

5、gandlaberrance．TLlA)是肿瘤坏死因子超家族成员15(TNFsuperfamilymember15．TNFSFl5)基因的蛋白产物，可通过与其受体一死亡受体3(deathreceptor3，中文摘要DR3)结合，为T淋巴细胞的分化提供协同刺激信号，影响机体免疫调节。近来对TLlA的研究表明，TLlA与IBD密切相关，TNFSFl5基因诱导TLlA的表达促进了IBD的发生与进展，TNFSFl5基因作为IBD的易感基因己得到证实。Dr．Targan及其课题组成员研究证实，TLlA及其受体可通过影响肠黏膜T

6、细胞的活化、增殖，诱导Th细胞极化，从而导致肠黏膜免疫系统耐受调节紊乱，由此引发肠道炎症反应，从而参与IBD的发生。新近的研究进一步发现TLlA过表达转基因小鼠结肠炎模型出现肠炎并发肠纤维化改变。这些都证实了TLlA在IBD肠黏膜T细胞介导的免疫反应中发挥重要作用，其表达促进了肠黏膜的炎症和纤维化发生。尽管TLlA在肠道炎症中的研究已取得进展，但其在肠道纤维化发生中的作用机制仍不明确，且干预TLlA能否成为逆转肠纤维化的新靶点尚需进一步探究。为此，本实验利用野生型(wildtype，WT)C57BL／6小鼠及转基因(

7、LCK．CD2．TLlA．GFP．transgenic，L．Tg)两种遗传背景的小鼠建立实验性结肠炎并发肠纤维化模型，研究TLlA在诱导小鼠肠纤维化中的作用，并探讨肠纤维化过程中肠成纤维细胞以及胶原代谢的改变，旨在揭示TLlA在实验性结肠炎相关肠纤维化发生中的机制，为探索防治肠纤维化的新靶点提供实验依据。实验内容主要包括以下三部分：第一部分TLIA在TNBS诱导的小鼠实验性结肠炎炎症中的作用目的：建立TNBS诱导的实验性结肠炎小鼠模型，探讨TLlA在TNBS诱导的小鼠实验性结肠炎肠黏膜炎症中的作用。方法：①采用rea

8、l-timeQ．PCR方法进行LCK-CD2．TLlA．GFP基因型小鼠的鉴定与筛选；②通过三硝基苯磺酸(Trinitro．benzene．sulfonicacid．TNaS)Z,醇溶液灌肠建立实验性结肠炎模型，L．Tg小鼠与C57BL／6WT小鼠(6．8周)随机分为Control／WT组、EtOH／WT组、TNBS+EtOH／WT组、Cont