mirnas在结肠炎相关结肠癌发生过程中的作用机制研究

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1、硕士学位论文学校代码：10023学号：$2011003006MiRNAs在结肠炎相关结肠癌发生过程中的作用机制研究TheroleofmiRNAsincolitis—associatedcoloniccarcinogenesis所院：肿瘤研究所姓名：李伟伟指导教师：汪红英教授导师小组：汪红英教授刘芝华教授徐宁志教授学科专业：细胞生物学研究方向：分子肿瘤学完成日期：二零一四年五月图表索引⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯5英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7中英文缩略语表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第一部分MiR．155在结肠炎相关结肠癌发生过程中的表达变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13一．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13二．主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14三．实验方法⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15四．统计学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．191．AOM．DSS模型能有效模拟人的结肠炎相关结肠癌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．192．miR．155在结肠炎相关结肠癌发生过程中表达升高⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．203．miR-155与DSS引起的慢性炎症无关⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯204．初步筛选miR．155的靶基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯215．P

4、CR验证miR-155的潜在靶基因在结肠炎相关结肠癌发生过程中的变化⋯．⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯．⋯．⋯．⋯⋯．．⋯．⋯．⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯．．．：!：；讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．26第二部分MiRNAs介导一氧化氮诱导的结肠癌细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28

5、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30一．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30二．主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37三．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38四．统计学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．451．NO能显著诱导结肠癌细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．452．p53的缺乏显著抑制NO诱导的细胞

6、凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．473．miRNA参与NO诱导的RKO细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯484．p53的缺乏显著抑制某些NO诱导的miRNA表达升高⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50做一脲北京协和医学院中国医学科学院硕士研究生学位论文目录5．进一步证实p53调控NO诱导的rniR．34c．5p、miR．203和miR．1301的表达升高⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯526．敲降受p53调控的miR一34c．5p、miR．203和miR．1301能够抑制NO诱导的细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯547．在p53突变的HT-29细胞中过表达miR-34c．5p、miR．203和miR．1301能减弱HT-29对NO的耐受⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．558．在HCT-116细胞中进一步证实miR-34c．5p、miR．203和miR．1301在NO诱导的细胞凋亡过程中受p53调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．589．bcl．xL不是NO诱导的miR．34c．5p、miR．203和miR．1301的下游靶基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6110．受野生型p53调控的miR-34e-5p、miR-203和miR-1301与iNOS在临床结肠癌患者标本中的相关性验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．64／J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，66参考