tim-3信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用

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1、南昌大学硕士学位论文Tim--3信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用姓名：钟玫君申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：谢勇201206一塑．燮燮摘要背景与目的：炎症性肠病(IBD)的病因和发病机制目前尚不清楚，但已明确Th免疫反应和Toll样受体(TLR)信号通路异常在其中起着重要作用，并且这些异常在不同类型的IBD(UC和CD)qb有所不同，但它们具体的调控机制迄今仍不是很明确。Tim一3信号通路是新发现的调节Th免疫反应的核心环节，并且与TLRs信号通路有密切关系。然而Tim．3信号通路在IBD发生发展中的作用，及它与IBD的Th免疫反应和TLRs信号通路变化的关系目前尚不清楚

2、。为此，本研究在体内不同类型小鼠实验性结肠炎模型(分别类似人类的UC及CD的动物模型)中观察了Tim一3信号通路、TLRs信号通路和调节性T细胞(Treg)的变化，并以它为干预靶点，观察干预Tim．3信号通路对不同类型IBD的TLRS信号通路和Treg的影响，及其与疾病的的关系，从一新的角度探讨IBD的发病机制，为IBD的防治提供新的靶点和方向。方法：1．实验分组：分为下以几组：(1)Tim．3抗体未处理小鼠，(2)Tim．3抗体预处理小鼠；每组内再分别分为：①对照组，②DSS模型组，③TNBS模型组。2．IBD模型的建立：(1)DSS诱导小鼠炎症性肠病模型的建立：6"-'8周龄的

3、BALB／C小鼠自由饮用5％DSS溶液7天，建立小鼠急性结肠炎模型。对照组只饮用清洁饮用水。(2)TNBS诱导小鼠炎症性肠病模型的建立：6～8周龄的BALB／C小鼠于禁食、不禁饮24小时后，乙醚麻醉，用3．5F导管从肛门插入肠道深约5．5cm，灌注TNBS／50％乙醇溶液100Itl，对照组灌注生理盐水1009l，之后将小鼠倒置60秒。7天后处死小鼠。(3)小鼠Tim．3信号通路的干预：小鼠建模前12h腹腔内注射10011g抗．Fc抗体消除非特异性吸附，再给予10011g抗．Tim．3mAb腹腔注射，对照小鼠给予同等剂量的IgGl。3．各项指标的观察和检测：①观察各组小鼠每天体重、

4、疾病活动指数DAI的变化；摘要一●．一———————————————————————————————————————————————一②肉眼观察小鼠结肠大体形态的改变，HE染色观察小鼠结肠病理组织学改变；(DWestembolt方法检测小鼠结肠组织中Tim一3、Tim一1、Foxp3、MyD88、TLR4、SIGIRR蛋白的表达：④免疫组织化学染色检测小鼠结肠组织中Foxp3、MyD88、SIGIRR和NF·出p65的表达。结果：(1)小鼠体重及DAI积分变化①无论是在Tim-3抗体未处理组还是处理组，对照组小鼠体重呈持续上升状态，模型组小鼠在造模后体重开始下降j在实验第5天各组体

5、重均下降至最低点，随后逐渐回升。在实验第5、7天各模型组小鼠体重下降百分比均明显高于相应对照组(P<0．01)，两模型组之间比较无差异(P>0．05)。Tim一3抗体预处理的各模型组体重下降百分比均低于未处理组，在第7天的TNBS组有统计学意义(P<0．05)，其他组间差异均无统计学意义(P>0．05)。②各组小鼠DAI积分在实验第5、7天都有显著差异，无论是在Tim一3抗体未处理组还是处理组，各模型组显著高于相应对照组(P<0．01)，不同．模型组之间比较无差异(P>0．05)；Tim．3抗体预处理的各模型组DAI积分均低于未处理组，在第7天的TNBS组有差异(P<0．05)，其

6、他组间差异均无统计学意义(P>0．05)。(2)小鼠结肠病理学改变①小鼠结肠黏膜大体形态：无论是在Tim．3抗体未处理组还是处理组，对照组小鼠结肠黏膜未见充血、出血、水肿、糜烂、溃疡，DSS及TNBS组可见结肠黏膜有较明显充血、水肿、糜烂、溃疡；Tim．3抗体预处理的各模型组结肠黏膜充血、水肿和糜烂较未处理组稍有减轻。②HE染色观察各组小鼠的肠道病理组织学变化，无论是在Tim．3抗体未处理组还是处理组，DSS及TNBS组小鼠的结肠炎症程度、病变深度及隐窝破坏程度均高于相应对照组(P<0．05)；不同模型组之问比较无差异(P>0．05)。Tim．3抗体预处理小鼠，无论是TNBS组还是

7、DSS组，病理组织学损伤均显著低于未处理小鼠(P<0．01)。(3)小鼠结肠黏膜Tim．3蛋白表达无论Tim．3抗体处理与否，各组问小鼠肠黏膜Tim．3蛋白的表达无差异(P>0．05)；Tim．3抗体预处理小鼠，各模型组Tim．3蛋白的表达高于未处理小摘要鼠，但无统计学意义(P>O．05)。(4)小鼠结肠黏膜Tim．1蛋白表达在Tim·3抗体未处理组中，TNBS组高于对照组(P<0．05)，其它两组间比较均无差异(P>0．05)；在Tim．3抗体预处理组中，三组问比较