tim-1信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用

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1、南昌大学硕士学位论文Tim--1信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用姓名：王萍申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：谢勇201206摘要背景与目的：炎症性肠病(IBD)的发病机制和病因非常复杂，我们的前期研究和文献报道发现TLR信号通路和Th免疫反应的异常在其中起着十分重要的作用，并且这些异常在不同类型的IBD(CD和UC)中有所不同，但是其发生机制尚不明确。为何不同类型的IBD会出现不同的Th优势反应，它们的调控机制不清楚。Tim．1信号通路是最新发现的调节Th免疫反应的核心环节，并且与TLR信号

2、通路有着密切的关系。然而Tim．1信号通路在IBD发生发展中的作用，及它与IBD的Th免疫反应和TLR信号通路变化的关系国内外尚未见报道。为此，本文研究不同类型的小鼠实验性结肠炎(分别类似人类的UC和CD的动物模型)Tim．1信号通路的变化及其与调节性T细胞(Treg)和TLR信号通路的关系，并以此为干预靶点，分别观察Tim．1信号通路对不同类型小鼠实验性结肠炎的Treg细胞和TLR信号通路的影响，及其与疾病的的关系，从这一新的角度来探讨IBD的发病机制，为IBD的防治提供新的靶点和方向。方法：1．

3、实验分组(1)Tim．1抗体未处理小鼠组；(2)Tim．1抗体预处理小鼠组；每组内再分为：①正常对照组；②DSS模型组；③TNBs模型组。2．小鼠实验性结肠炎模型的建立(1)DSS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB／c小鼠自由饮用5％DSS溶液7天，建立小鼠急性结肠炎模型。(2)TNBS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB／C小鼠禁食、不禁饮24小时后，乙醚麻醉，用3．5F导管从肛门插入肠道深约5．5em处，灌注TNBS／50％乙醇溶液roost(含2mgTNBS的50％乙醇溶液)，之后将

4、小鼠倒置60秒。从造模第一天开始，每日观察并记录各组小鼠体重、大便性状，7天后处死小鼠。f3)小鼠Tim．1信号通路的干预：小鼠建模前12h，腹腔内注射100lag抗-Fc抗体消除非特异性吸附后，再给予25099抗一Tim·lAb腹腔注射，对照小鼠给予同等剂量的lgG2a。摘要3．观察以下各项指标：(1)各组小鼠每天的体重变化、结肠炎疾病活动指数(DAI积分)；f2)Nt艮观察小鼠结肠大体形态改变，HE染色观察小鼠结肠炎病理组织学损伤程度；(3)Westernblot法检Nd,鼠结肠组织中Foxp3

5、、MyD88、SIGIRR、Tim．1蛋白的表达；(4)免疫组织化学染色检测小鼠结肠组织中Foxp3、MyD88、SIGIRR、NF．1出p65蛋白的表达。结果：1．各组小鼠体重变化及DAI积分实验第5、7天，各模型组小鼠体重下降百分比均显著高于相应的对照组(P<0．01)。在Tim．1抗体预处理组中，DSS组小鼠体重下降百分比显著高于TNBS组(P<0．01)。小鼠体重变化在Tim．1抗体未处理组和预处理组之间有差异，仅实验第7天DSS组问差异有统计学意义(P<0．05)，其余组问差异无统计学意义

6、(P>0．05)。在实验第5、7天，无论是Tim．1抗体未处理组还是预处理组中，模型组小鼠DAI积分均显著高于相应对照组(P<0．01)。Tim．1抗体预处理的各组小鼠DAI积分均高于未处理组，但都无统计学意义(P>O．05)。2．小鼠肠黏膜大体形态和结肠组织病理变化(1)无论是Tim一1抗体未处理组还是预处理组，对照组小鼠结肠黏膜呈淡红色、光滑完整，未见充血、水肿、糜烂、溃疡，DSS组和TNBS组小鼠结肠黏．膜可见充血、水肿、糜烂。(2)无论是在Tim．1抗体未处理组还是预处理组，模型组小鼠的结肠

7、炎症程度、病变深度、隐窝破坏均显著高于对照组(P<0．01)oTim．1抗体预处理的各组小鼠病理组织学损伤程度均高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义(P<0．05)。3．小鼠结肠组织中Foxp3的表达(1)免疫印迹检测发现，在Tim．1抗体未处理组中，模型组Foxp3蛋白的表达低于对照组，但无统计学意义(P>0．05)。在Tim．1抗体预处理组中，对照组Foxp3蛋白的表达显著高于两个模型组(P<0．01)。Foxp3蛋白表达在Tim．1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义(P>0

8、．05)。摘要(2)免疫组化染色发现，无论是在Tim．1抗体未处理组还是预处理组中，对照组Foxp3阳性炎细胞数显著高于模型组(P<0．01)。1h．1抗体预处理的各模型组Foxp3阳性细胞数均低于未处理小鼠，但只有DSS组间差异有统计学意义(P<0．05)。4．小鼠结肠组织中SIGIRR的表达(1)免疫印迹检测发现，在Tim．1抗体未处理组中，对照组SIGIRR蛋白表达高于模型组(P<0．01，0．05)，DSS组高于TNBS组(P<0．05)。在Tim一1抗体预处