mir-148a和mir-409在胃癌转移中的作用及其机制研究

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1、复旦大学博士学位论文miR--148a和miR--409在胃癌转移中的作用及其机制研究姓名：郑必强申请学位级别：博士专业：肿瘤学指导教师：师英强2012-04-10miR．148a和miR．409在胃癌转移中的作用及其机制研究中文摘要miR-148a和miR一409在胃癌转移中的作用及其机制研究摘要越来越多证据表明microRNA(miRNA)与肿瘤发生发展密切相关，然而，有关miRNA与胃癌转移的报道较少。在本研究中，我们首先研究miR0148a在胃癌侵袭转移中的作用及其相关机制。我们发现miR．148a在胃癌组

2、织中平均下调4倍，miR-148a表达水平与胃癌分期和淋巴结转移显著负相关。功能上，表现为体外细胞实验上具有抑制胃癌细胞迁移侵袭能力和体内具有抑$0／j,鼠肺转移能力。作用机制上，我们进一步鉴定出ROCKl为miR．148a一个功能上的靶基因。过表达miR．148a下调细胞中ROCKlmRNA和蛋白水平，而抑制miR一148a表达则能提高ROCKl表达水平。荧光素酶实验证实miR-148a能直接和ROCKl3q_ITR上的2个位点结合。此外，在胃癌组织中我们发现miR-148a表达与ROCKl蛋白水平成负相关。干扰

3、ROCKl能抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力，进一步发现ROCKl可介导miR．148a影响胃癌细胞迁移和侵袭。此外，我们还研究了另外一个miRNA在胃癌中的作用和功能，发现miR．409—3p在胃癌中低表达，与胃癌分期和淋巴结转移成负相关。过表达miR．409抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力和小鼠肺转移及腹腔播散能力，而且我们还发现miR．409主要通过miR-409．3p发挥作用，而不是miR-409．5p。使用基因芯片和生物信息学方法发现促肿瘤转移基因RDX为miR-409．3p的一个潜在靶基因。进一步研究发现miR．

4、409．3p通过和RDX3qJTR结合抑制RDX的表达。干扰RDX的表达能抑制胃癌细胞迁移和侵袭，这一作用类似于miR．409高表达，在miR-409稳转株中恢复RDX表达能减弱miR．409抑制胃癌细胞的迁移和侵袭作用。综上所述，通过对miR．148a和miR．409的功能和作用机制研究，我们在胃癌中发现2个新的转移抑制基因miR-148a和miR-409，他们分别通过靶基因ROCKl和RDX抑制胃癌细胞的侵袭和转移。本研究提示在胃癌组织中miR．148a或miR．409表达越低，该患者越易发生淋巴结转移，肿瘤越

5、易进展，同时miR．148a和miR．409或许可应用于以后胃癌转移患者的治疗。关键词：胃癌，转移，miR．148a，miR．409，ROCKl，RDX复口．大学附属肿瘤医院博士论文miR．148a和miR．409在胃癌转移中的作用及其机制研究英文摘要TheStudyonFunctionsandMechanismsofmiR一148aandmiR．409intheMetastasisofGastricCancerABSTRACTEmergingevidencehasshownthataberrantlyexpres

6、sedmicroRNAs(miRNAs)arehighlyassociated讪t11tumourinkiation，developmentandprogression．However，littleisknownaboutthepotentialroleofmiRNAsingastriccancer(OC)metastasis．Inthisstudy，wefirstlyinvestigatetheroleandrelatedmechanismofmiR-148aingastriccancer(GC)metastas

7、is．WefoundthatmiR-148aexpressionWassuppressedbymorethan4foldsinGCcomparedwitlltheircorrespondingnon-tumoroustissues．andthedownregulatedmiR-148aWasnegativelyassociated、析tllTNMstageandlymph—nodemetastasis．FunctionalassaysdemonstratedthatoverexpressionofmiR-148as

8、uppressedGCcellmigrationandinvasioninvitroandlungmetastasisformationinvivo．Inaddition，weconfirmedthatROCKlWasadirectandfunctionaltargetofmiR-148a．overexpressionofmiR-148ainGCcellsc