ho-1对原代培养大鼠aec-ⅱ凋亡机制的影响

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1、遵义医学院硕士学位论文HO--1对原代培养大鼠AEC--Ⅱ凋亡机制的影响姓名：刘海霞申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：陈淼201205遵义医学院硕士学位论文HO·1对原代培乔大鼠AEC-II细胞凋亡机制的影响血红素加氧酶．1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型细胞凋亡机制的影响摘要目的：探讨血红素加氧酶．1(hemeoxygenase-1，HO-1)对大鼠原代培养的肺泡II型上皮细胞(alveolarepithelialcelltypeII，AEC-II)过氧化氢(hygrogenperoxide，H202)刺激后细胞内Cleaved。Caspase．3及Cyt—C

2、表达的影响。方法：选取健康雄性SD大鼠，予戊巴比妥钠、肝素腹腔注射麻醉抗凝、气管插管、开胸肺动脉置管，灌洗取肺，胰酶消化，制成肺组织悬液，分离提纯AEC．II，将细胞以2×106个／ml接种于细胞培养瓶，原代培养24h，将细胞随机分为四组：正常对照组，H202损伤组，HO．1组，HO．1抑制组(锌原卟啉Ⅸ)。采用H202(O．5mmol／L)培养基中直接加入损伤AEC．II，模拟氧自由基(Reactiveoxygenspecies，ROS)攻击损伤人体内AEC．II情况，建立AEC．II凋亡模型；用HO．1(O．2gmol／L)或锌原卟啉Ⅸ(20pmol／L

3、)进行细胞培养基上损伤前直接预处理。电镜鉴定AEC—II，流式细胞仪检测药物干预前及干预后细胞凋亡率，蛋白印迹法(Westernblotting，WB)检测目标蛋白Cleaved．Caspase．3及Cyt．C表达变化及时问相关性。结果：电镜下鉴定可见AEC．II的特征性结构：细胞表面长短不一、粗细不等微绒毛，胞浆内含数量不等、大小不一、不同成熟阶段嗜锇性板层小体。流式细胞仪检测：药物干预前，各组细胞凋亡率、存活率基本处于同一水平(P>0．05)；药物干预后，与正常对照组比较，H202损伤组、HO一1抑制组细胞凋亡率增加(尸<0．05)，且12h内随H202

4、作用时间延长，细胞凋亡率随之升高；与H202组比较，HO一1组AEC-II凋亡率明显降低(P<0．05)，差异有统计学意义。WB法：与正常组比较，HO．1组Cleaved．Caspase．3、C舛．C表达减弱，且12h内随时间的变化差异明显，差异有统计学意义(尸

5、示HO．1对氧化损伤AEC．II的保护过程有线粒体凋亡通路参与。关键词：血红素加氧酶．1；凋亡机制；原代培养；肺泡II型上皮细胞；半胱天冬酶；细胞色素C；遵义医学院硕士学位论文HO．1对原代培养大鼠AEC．II细胞凋亡机制的影响Theeffectsofhemeoxygenase一1onApoptosismechanisminprimaryculturedrat’SalveolarepitheliumcelltypeⅡAbstractObjective：Toexploretheeffectsofhemeoxygenase-1(HO一1)ontheapoptos

6、is，expressionofCleaved-Caspase·3andCyt-Conhydrogenperoxide(H202)oxidativedamageinprimaryculturedrat’salveolarepitheliumcelltypeII(AEC—II)Methods：HealthymaleSDratswereintraperitoneal-injectedofSodiumpentobarbitalandheparintoanesthesiaandanticoagulate，donetheendotrachealintubationand

7、thoracotomy，pulmonaryarteryintubation，lavagedandputoutthelung，digestedbytrypsin，thenseparatedandpurificatedtheAEC-II，inoculatedthecellsintocultureflasksby2×106／mlprimaryculturedfor24h．Thecellsweredividedrandomlyintofourgroups：normalcontrolgroup，H202group，HO一1inhibitiongroup(zincpro

8、toporphyrinIX)．H202(0．5mmo