fasfasl在酒精性肝炎肝纤维化发病与进展中作用及机制研究

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1、河北医科大学硕士学位论文Fas/FasL在酒精性肝炎/肝纤维化发病与进展中作用及机制研究姓名：任伟光申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：南月敏201203中文摘要Fas／FasL在酒精性肝炎／肝纤维化发病与进展中作用及机制研究摘要目的：酒精性肝病(alcoholicliverdisease，ALD)是指由于长期大量饮酒而导致的肝脏损害，包括单纯脂肪肝、酒精性肝炎及肝纤维化、肝硬化【l】。酒精性肝炎(alcoholichepatitis，A11)／酒精性肝纤维化(alcoholicliverfibrosis，ALF)是ALD病变过程的重要阶段，

2、以肝细胞脂肪变伴有坏死性炎症为主要特征，进一步导致肝硬化，并是肝细胞癌的致病因素之一。肝细胞凋亡是多种炎症性肝损伤的病理表现，其由多种细胞因子参与的外源性与内源性凋亡信号通路激活致肝实质细胞程序性死亡、进而可诱发肝脏炎症及纤维化。Fas／Fas配体(FasLigand，FasL)系统是调节细胞凋亡的主导基因调控系统之一，我们的前期研究发现，Fas／FasL系统在非酒精性脂肪性肝炎的发生及发展过程中起着重要的作用，但其在酒精性肝炎、肝纤维化发病及进展中细胞凋亡的作用及调节机制尚不清楚，针对细胞凋亡信号转导通路中的靶基因调控药物及基因治疗措施亦亟待探

3、讨。本研究旨在探明酒精性肝炎、肝纤维化中Fas／FasL系统及其下游相关基因表达的变化及其在该病进展中的作用，以进一步阐明酒精性肝病的发病机制，为该病的治疗提供新的途径及科学依据。方法：选用健康雄性C57BL／6Jdx鼠，分别采用含4％酒精Lieber．DeCarli液体饲料4周及联合Lieber-DeCarli液体饲料与微量四氯化碳8周建立小鼠酒精性肝炎、酒精性肝纤维化模型，以等热量麦芽糊精代替酒精喂养小鼠作为对照组。造模完成处死动物，留取血清及肝组织标本，部分肝组织用4％中性甲醛固定，其余肝组织以液氮快速冷冻，．80。C保存备用。血清丙氨酸氨

4、基转移酶(alanineaminotransferase，ALT)及血清门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase，A．ST)采用日本OlympusAU2700全自动生化分析仪酶法测定。肝组织切片采用HE染色观察肝脂肪变、炎症活动及纤维化程度；Masson染色观察肝纤维化程度。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminaldeoxynueleotidyltransferasemediatednickendlabeling，TUNEL)检测肝细胞凋亡情况。分别采用RT．PCR、Westernblot及免疫

5、组织化学染色检测肝组织Fas、FasL、肿瘤坏死因子．a中文摘要(tumornecrosisfactor-a，TNF。Q)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cysteineaspartate．specificproteases3，caspase3)及细胞色素P4502El(CytochromeP4502El，CYP2E1)mRNA及蛋白表达。实验数据以均数土标准差(舅土s)表示，采用SPSS13．0统计软件进行单因素方差分析，用最小显著差-t(theleastsignificantdifference．毛LSD．f)检验进行组间比较，P

6、为差异有统计学意义。结果：应用含40／0酒精Lieber-DeCarli液体饲料联合微量四氯化碳腹腔注射可快速建立小鼠酒精性肝炎、肝纤维化模型，且造模方法简单易行，动物死亡率低，模型稳定性好，可作为酒精性肝纤维化研究的实验支撑模型。肝细胞凋亡数随肝脏炎症及纤维化的加重而增高，并伴有凋亡相关基因表达增强，对照组、酒精性肝炎组、酒精性肝纤维化组小鼠凋亡相关基因表达水平依次升高(P

7、血清生化学改变随造模时间延长，酒精性肝纤维化组小鼠血清ALT和AST水平显著高于酒精性肝炎组及对照组(P

8、纤维化发病及进展中的表达变化酒精性肝纤维化组小鼠肝组织Fas、FasL、TNF．扒caspase3、CYP2E1mRNA及蛋白表达呈～致