脂肪间充质干细胞复合纤维蛋白胶立体培养的实验研究

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1、分类号：R6单位代码：10752密级：公开学号：2009155宁夏医科大学硕士研究生学位论文脂肪间充质干细胞复合纤维蛋白胶立体培养的实验研究Experimentalofthree-dimensionalculturewithAdipose-derivedstemcells/fibringelcomplexinskeletallymaturerabbit学位申请人：李文龙指导教师：牛东生教授申请学位门类级别：医学专业名称：外科学研究方向：骨性关节炎所在学院：临床医学院论文完成日期：2012年4月宁夏医科大学研究生院NingxiaMe

2、dicalUniversityThesisforApplicationofMasterDegreeExperimentalofthree-dimensionalculturewithAdipose-derivedstemcells/fibringelcomplexinskeletallymaturerabbitStudent’sName:LiWenlongSupervisor：NiuDongshengSubjectCategory:MedicalMajor:SurgerySpecialty:OsteoarthritisColleg

3、e:ClinicalInstituteCompletionDate:April2012宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留

4、使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要脂肪间充质干细胞复合纤维蛋白胶立体培养的实验研究摘要第一部分成年兔脂肪间充质干细胞分离、培养、鉴定及成软骨诱导目的研究脂肪间充质干细胞体外培养生

5、物学特性。建立其分离和培养的方法并探讨其向软骨细胞诱导分化的能力方法成年新西兰大白兔取腹股沟及颈部脂肪，胶原酶消化分离。用含9-10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养传代。在倒置显微镜下观察细胞增长的形态。对3.7代细胞行MTT测定其增值能力。对3代细胞行软骨诱导分化。观察倒置显微镜观察下细胞的增长情况。诱导分化1周后进行细胞番红0染色，RT-PCR测定软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达。结果原代脂肪间充质干细胞培养2天后开始贴壁生长，呈现梭形及多角细胞生长，7-9天后细胞几乎融合呈旋涡状排列。培养的脂肪间充质干细胞体外增值较快，增长比

6、较稳定。成软骨诱导后2一3天细胞发生聚集。对高密度细胞团块番红O染色阳性，未发生聚集的细胞则呈弱阳性或阴性。RT-PCR测定显示细胞表达11型胶原mRNA。关键词脂肪间充质干细胞，体外培养，软骨分化第二部分不同密度脂肪间充质干细胞复合纤维蛋白胶对成软骨能力的影响目的研究不同种植密度的兔脂肪脂肪间充质干细胞复合纤维蛋白胶体外三维立体培养下，细胞成软骨分化的能力。9-110-111-1方法取3代培养兔脂肪间充质干细胞分别以2×10L，2×10L，2×10L，种I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要植于含纤维蛋白胶的96孔板中，倒置显

7、微镜及扫描电镜观察。成软骨诱导培养3周后，取样、切片行苏木精-伊红染色、胶原免疫组化，RT-PCR检测。11-1结果诱导三周后各组细胞在纤维蛋白胶上黏附较好，且高密度2×10L，组细胞排列紧密，基质形成较多，扫描电镜下高密度组纤维蛋白内细胞粘附生长较多，各组Ⅱ型胶原阳性，随种植密度的升高有逐渐递增的趋势。RT-PCR检测结果显示，随细胞种植密度升高，Ⅱ型胶原mRNA、蛋白聚糖表达均增强。关键词脂肪间充质干细胞，支架，软骨分化II宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要Experimentalofthree-dimensionalcu

8、lturewithAdipose-derivedstemcells/fibringelcomplexinskeletallymaturerabbitAbstractPartI:Adultrabbitadipose-derivedmesenchyma