皂角刺总黄酮的提取及抗肿瘤细胞株的活性研究

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1、中图分类号:R284；R979.1；R965.1硕士学位论文皂角刺总黄酮的提取及抗肿瘤细胞株的活性研究院（系）、所药学院研究生姓名汪洁学科、专业药理学导师姓名肖顺汉教授二Ο一二年四月目录1皂角刺总黄酮的提取及抗肿瘤细胞株的活性研究………………11.1中文摘要……………………………………………………………11.2英文摘要……………………………………………………………41.3前言…………………………………………………………………71.4材料与方法…………………………………………………………111.5结果

2、…………………………………………………………………211.6讨论…………………………………………………………………281.7结论…………………………………………………………………351.8参考文献……………………………………………………………361.9英汉缩略词对照表…………………………………………………392致谢…………………………………………………………………403肿瘤靶点—端粒酶的研究进展（综述）…………………………41附1论文独创性及授权书1皂角刺总黄酮的提取及抗肿瘤细胞株的活性研究摘要目的

3、:以不同极性溶剂分别回流提取中药皂角刺总黄酮中有效组分，以CCK-8法进行活性筛选，通过硅胶柱层析分离，测定皂角刺总黄酮各分离样品对体外三种肿瘤细胞增殖作用的影响，旨在为皂角刺总黄酮的进一步分离及制备单体的研究提供科学的实验依据。方法:在前期实验研究的基础上，以最佳的提取工艺条件回流提取皂角刺总黄酮内各组分，以CCK-8法进行筛选后，对有效组分进行硅胶柱层析，根据薄层色谱结果，对所得样品进行鉴定。最后分别选用HCT116人结肠癌细胞株，Bel-7402人肝癌细胞株，K562人白血病细胞株，体外培养于

4、含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，置于37℃、5%CO2培养箱中。取对数生长期的细胞，调整合适的细胞悬液密度，分别接种-1于96孔培养板，用不同浓度（12.5、25、50、100、200μg·mL）的皂角刺总黄酮正丁醇提取物各分离样品分别处理48小时后，以CCK-8法测定皂角刺总黄酮正丁醇提取物各分离样品对体外肿瘤细胞增殖作用的影响，并对2组间数据进行t检验，分析两者是否存在统计学意义。结果:皂角刺总黄酮正丁醇提取物对各肿瘤细胞增殖的抑制作用随着浓度的增加而增强，呈现出较好的浓度依赖性。皂角

5、刺总黄酮正丁醇提取物对K562人白血病细胞株，HepG2人肝癌细胞株，Bel-7402人肝癌细胞株，HCT116人结肠癌细胞株IC50分别为77.58±28.98，-188.61±18.05，66.80±25.65，49.30±12.43mg·L，提示皂角刺总黄酮正丁醇提取物有较强的体外抗肿瘤活性。经过硅胶柱层析，得皂角刺总2黄酮正丁醇提取物各分离样品，以薄层色谱确定其在分离过程中未发生化学变化。以CCK-8法测定皂角刺总黄酮正丁醇提取物各分离样品对体外肿瘤细胞增殖作用，样品A对肿瘤细胞生长的抑制活

6、性在3种受试肿瘤细胞中都能观察到，具有较广的抗肿瘤活性，它们的IC50分-1别为85.55±33.44，24.54±5.36，77.08±19.79μg·mL。样品B对各肿瘤细胞的抑制作用均不明显。样品C对Bel-7402人肝癌细胞株和K562人白血病细胞株的抑制作用较为明显，基本呈现为浓度依赖性，它们的-1IC50分别为54.41±16.71，139.5±53.03μg·mL。样品D对HCT116人结肠癌细胞株的抑制作用呈现较为明显的浓度依赖性，它的IC50为-187.31±17.78μg·mL。

7、样品E对HCT116人结肠癌细胞株和K562人白血病细胞株呈现较为明显的浓度依赖性，特别是对HCT116人结肠癌细-1胞株，当给药浓度达到200μg·mL时，抑制率明显增加。它们的IC50-1分别为90.87±22.83，135.63±33.37μg·mL。而样品F则对HCT116人结肠癌细胞株和K562人白血病细胞株具有抑制作用，并且呈现了较为平稳的浓度依赖性，它的IC50分别为81.73±12.45，76.05±12.02-1μg·mL。P<0.05,表明皂角刺总黄酮正丁醇提取物及其各分离样品的

8、抗肿瘤活性差异均有统计学意义。结论:1.选用CCK-8法测定可知，皂角刺总黄酮正丁醇提取物具有较强的体外抗肿瘤活性，并且呈现出一定的浓度依赖性。2.用硅胶柱层析方法，进行皂角刺总黄酮正丁醇提取物的进一步分离，得到六个样品。3.薄层色谱法，进行分离样品的鉴定，方法简单，而且稳定性好，结果稳定可靠。4.选用CCK-8法，证实皂角刺总黄酮正丁醇提取物各分离样品均具有抗肿瘤活性。这对3其进一步分离及制备单体的研究有重要意义。关键词：皂角刺总黄酮的提取硅胶柱层析薄层色谱抗肿瘤活