左卡尼汀对四氯化碳诱导的hl7702细胞损伤的保护作用及其机制研究

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1、河南大学硕士学位论文左卡尼汀对四氯化碳诱导的HL7702细胞损伤的保护作用及其机制研究姓名：王雪霞申请学位级别：硕士专业：药物分析学指导教师：王先友201205摘要目的：建立四氯化碳CCl4诱导的HL7702细胞氧化损伤致细胞凋亡病理模型，筛选并确定左卡尼汀(L。camitine，LC)增强细胞活性的有效浓度，探究LC抑制CCh诱导的HL7702细胞氧化损伤的作用及机制。方法：应用L9(34)正交表进行正交试验，选择两个因素和三个水平(CCh浓度分别为4、8、16mmol·L～，损伤时间分别为3、6、9h)，建立CCl4诱导HL7702细胞最佳细胞凋亡病理模型；MTT法观察LC(1

2、0-5000pmol·Ld)对HL7702细胞活性的影响。实验分组：空白对照组、阳性对照组(5．68mmol·L。1维生素C)、CCl4模型组、不同剂量LC预处理组(1000、3000、5000pmol·LdLC)；MTT法检测细胞活性；酶生化法测定细胞内丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性的影响；2’，7’．二氯氢化荧光素二酯(DCFH．DA)为荧光探针，检测细胞ROS(12h)生成量；采用Hoechst33258荧光染色法倒置显微镜观察HL7702细胞凋亡形态；免疫印迹法检测NF．KB／p65、P．NF．1CB／p65

3、、Bcl．2、Bax蛋白的表达量。结果：正交试验结果表明，8mmol·L～CCl4损伤HL7702细胞6h为最佳细胞凋亡模型；10-5000lamol·L。范围内LC可剂量依赖性地提高细胞活性(尸均

4、使CCh损伤后HL7702细胞活性明显增强，能明显抑制CCh损伤后ALT、AST、MDA水平升高和SOD活性减弱(尸均<0．05)；荧光倒置显微镜观察发现，不同浓度的左卡尼汀预处理12h，可使细胞形态明显改善。左卡尼汀可显著减少CCl4损伤HL7702细胞后ROS的含量；抑制CCl4诱导的HL7702细胞内NF．v．B的活化(尸<0．05)，提高Bcl一2／Bax比／值，以上效应均呈剂量依赖性。／j。。。结论：正交试验建立CCh诱导HL7702细胞氧化损伤致细胞凋亡模型(8mm01．LJCCh、6h)；LC在1000。50001．tmol·L_剂量范围内对HL7702细胞无细胞毒作

5、用；LC对HL7702细胞保护作用机制与其抗氧化特性和调节NF—r,J3／p65与Bcl．2／Bax表达有关。关键词：左卡尼汀，HL7702细胞，四氯化碳，氧化损伤，凋亡ABSTRACTOBJECTIVE：ToestablishCCl4一inducedapoptotic(oxidativedamage)modelofHL7702cells，screenanddeterminetheeffectiveconcentrationofL—carnitine(LC)；andinvestigatethemechanismofLCprotectingHL7702cells．METHODS：CC

6、l4．inducedoxidativeapoptoticmodelofHL7702cellsWaSestablishedbyL9(34)orthogonaldesign．TwofactorsandthreelevelswereCChconcentrations(4，8，16mmol·L。1)，injurytime(3，6，9h)．MTTaSsaywasusedtodeterminetheeffectiveconcentrationofLC(10—5000pmol·L以)Oilcellviability．Thecellsweredividedintofourgroups：contro

7、lgroup，5．68mmol／LvitaminCgroup，CCl4modelgroup，flavonoidsfromL-carnitinegroups(1000，3000，50009mol·L～flavonoidsfromL-carnitine)．TheviabilityofHL7702cellsweredetectedbyMTTassayAlanineaminotransferase(ALT)，aspartateaminotransferase(AST)，Sup