血管活性肠肽纳米粒的制备及其对帕金森病细胞模型保护作用的研究

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1、厦门大学硕士学位论文血管活性肠肽纳米粒的制备及其对帕金森病细胞模型保护作用的研究姓名：王吴芳申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：杜青云；朱铉201205摘要帕金森病是继老年痴呆症之后世界第二大威胁人类健康的神经退行性疾病，已经严重影响1。2％老年人口的生活质量。随着生物医学技术的迅速发展，目前已经发现许多对中枢疾病(如帕金森病、老年痴呆症)具有治疗活性的多肽和蛋白类药物。但血脑屏障的存在，很大程度上限制了这些药物的临床给药和治疗作用的发挥。因此，研究多肽和蛋白类药物的新型给药系统，具有很大的研究价值和社会意义。血管活性肠肽(、砸

2、oactiveintestinalp01)，peptide，ⅥP)是具有重要调节作用的神经多肽，它对帕金森病和老年痴呆症的防治都有较好的作用。但是血管活性肠肽在体内的半衰期较短，稳定性差，不易透过血脑屏障，因此和其他内源性多肽一样，其临床运用受到限制。因此本课题目的在于研究包封血管活性肠肽的纳米粒及其体外神经保护作用。本论文主要包括以下内容：1．ⅥP体外方法学的建立和稳定性考察。利用高效液相色谱法对ⅥP的含量进行测定，研究了ⅥP多肽的稳定性。结果表明：ⅥP在．80℃下保存最稳定，至少可保存一个月不降解，故该药制成制剂宜冷冻保存。在室

3、温(～25℃)范围内、pH值2．O～7．O之间以及搅拌速度为800～1000rpm搅拌4h的条件下，制备成的纳米粒不会影响ⅥP的稳定性。2．纳米粒的制备。采用改良的乳化聚合法制备纳米粒，对表面活性剂的种类和用量、载体材料的用量、药物与材料比例、pH值等进行单因素实验考察；采用正交设计优化处方，确定最佳处方，得到粒径为147．7nm，包封率为95．3％，载药量为4．77％的聚山梨酯．80(Polysorbate80，P80)修饰的ⅥP纳米粒。同时制备了可以被SH．SY5Y细胞摄取的FITC纳米粒，为下一步体外药效学研究奠定基础。3．Ⅵ

4、P纳米粒体外药效学研究。在体外细胞模型实验中，以6．羟基多巴胺(6．hydroxydop锄ine，6．OHDA)诱导SH．SY5Y细胞凋亡成功建立了帕金森病细胞模型。实验结果显示：制备的聚山梨酯．80修饰的纳米粒无细胞毒性。聚山梨酯．80修饰的ⅥP纳米粒显著提高了6．OHDA诱导的SH．SY5Y细胞活力和抗凋亡能力，并显著改善了6．OHDA诱导的SH．SY5Y细胞线粒体膜电位。说明聚山梨酯．80修饰的Ⅵ口纳米粒提高了ⅥP的稳定性和被细胞摄取能力，与ⅥP溶液相比有更强的体外神经保护活性。因此聚山梨酯．80修饰的Ⅷ纳米粒可能具有更好的预

5、防帕金森病的潜力。关键字：血管活性肠肽：纳米粒；帕金森病IIABSTRACTPaddnS0n’sdisease(PD)ismesecondmostcommonne啪degenemtivedisord％a船rAl曲eimer’sdise邪e．Ith嬲a位ctI甜aboutl～2％ofⅡ1epopulationoVernleageof60yearsseriously．1hedeVel叩mentofBiomedicalTechnolog)，hasco耐butedt0tllediscoVeriesofp印tides锄dproteins、)I

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