血清中抗癌多肽药物曲普瑞林的spe净化方法研究

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1、血清中抗癌多肽药物曲普瑞林的SPE净化方法研究计：学位论文：30页表格：O个插图：10幅孔松指导教师：邹丽娟教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：肿瘤学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地杰外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡

2、献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：磁签字日期：丝年且三曰目三王目豕一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)日!J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一5(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯9(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOD019三、综述⋯⋯⋯IOOOOOOOOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOOOOO⋯21(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··30血清中抗癌多肽药物曲普瑞林的SPE净化方法研究硕士生姓名：指导教师：指导小组：专业名称：孔松刍F丽童

4、再教授张秀莉副研究员肿瘤学摘要背景：随着人类对自身生命现象探讨的深入和对于体内蛋白质及肽类的研究越来越透彻，对于活性多肽(生物肽)的研究受到越来越多的关注。近年来，部分生物肽已经作为药物开发，用于多种疾病的防御和治疗。曲普瑞林(Triptorelin)是一种人工合成的促性腺激素释放激素(gonadotropin—releasinghormone，GnRH)十肽类似物。在临床上用于子宫肌瘤、乳腺癌、子宫内膜癌和前列腺癌的治疗。随着多肽类药物的开发和使用，对分离和检测多肽类药物方法的需求越来越迫切。如唾液、血液、尿液中药物浓度和存在形式的检测对于研究该药物的代谢时

5、间、途径及产物有着重要的意义，可提供该药物的使用剂量、给药时间、及毒副作用等数据。目前体内多肽类药物的检测方法有直接检测和富集后再检测两种方法。对于药物浓度较高受基质干扰较少的药物，直接检测的方法较为快速。但，对大多数药物而言，体内存在的浓度较低，且受基质干扰较大，需要经过适当的前处理，排除基质的干扰并对待测药物加以浓缩，才能检测到。多肽类药物的浓缩方法较多，如蛋白质沉淀法，液液萃取法，固相萃取法等。蛋白质沉淀法，可以除去基质中大量干扰多肽类药物检测的蛋白，对目标多肽有一定的富集作用，但对基质中其它干扰性多肽的除去并不理想。液液萃取法是利用目标多肽和干扰物质在

6、互不相容的两相中溶解度的不同而加以分离，这种方法在一定程度上可以实现杂质的排除和目标化合物的富集。但液液萃取存在一些问题，如选择性不高，且有机溶剂使用量大，对部分目标化合物难以找到完全将其与基质分离的互不相溶的两相。固相萃取由于其高效、可靠及耗用溶剂量少等优点，在检测等许多领域得到了快速发展。准确测定血液中药物浓度，能够有效地监测药物在人体或动物体内的使用及代谢情况，更好地指导临床用药；固相萃取技术作为药物样品的色谱分析前处理技术，被广泛应用在药代动力学研究中。目的：本实验选用蛋白沉淀和固相萃取联用对血清进行前处理，采用乙腈沉淀蛋白后，上清液再利用反向模式、亲

7、水模式、离子交换模式的固相萃取做富集，对经过一系列前处理的血清多肽进行富集后，联合UPLC／Q—TOF分析方法，建立一种检测血清中的多肽药物的方法。通过考察多组患者血清中所检测到的标记的多肽药物，来验证方法的可用性，同时为对复杂样品(如血清、尿液等)的处理及检测提供指导方法和理论依据，并为进一步研究其它肿瘤多肽药物打下基础。方法：收集60例癌症患者血清分装、乙腈沉淀，再利用反向模式、亲水模式、离子交换模式的固相萃取做富集，最后应用纳升级高效液相色谱．质谱(1lanoUPLC．MS)联用技术进行色谱分离、质谱检测、markerlynx软件进行数据处理、数据搜库、

8、鉴定检测结果。结果：三种模式下均成功检