小鼠糖尿病性角膜病变模型的建立及上皮病变的初步研究

《小鼠糖尿病性角膜病变模型的建立及上皮病变的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、青岛大学硕士学位论文小鼠糖尿病性角膜病变模型的建立及上皮病变的初步研究姓名：孙光华申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：史伟云20120602摘要小鼠糖尿病性角膜病变模型的建立及上皮病变的初步研究目的：研究链脲佐菌素(Streptozocin，STZ)腹腔注射诱导的糖尿病小鼠模型中角膜病变的病理变化及其机制。方法：建立STZ腹腔注射诱导C57BL／6小鼠的糖尿病模型，在成模2．16周分别行1％虎红染色检查角膜上皮完整性；角膜上皮刮除后，荧光素钠染色观察比较角膜上皮的愈合速度；病理检测角膜的组织形态和结构的变化；免疫组化检测刮除上

2、皮和未刮除上皮DNA损伤标记8-OHdG的表达情况；透射电子显微镜检查角膜在超微结构水平的变化。结果：STZ腹腔注射后，C57BL／6小鼠逐渐表现出糖尿病多饮、多食、多尿、体重下降等典型症状，其血糖稳定维持在较高水平(18mmoUL)，体重较正常小鼠明显偏低。虎红染色发现，成模2周的小鼠角膜即已出现点状着色，且随着病程的延长，染色面积和程度逐渐加重，到成模16周几乎呈全角膜着色。在上皮愈合速度方面，刮除角膜上皮后，成模2周的小鼠角膜上皮在40小时即完全愈合(与正常小鼠相似)，成模4周小鼠上皮愈合时间为120小时，成模8周、12周、

3、16周上皮完全愈合的时间为144小时左右，其中成模16周的小鼠在96小时至120小时上皮缺损的范围再次扩大，后逐渐缩小愈合，呈现反复现象。病理检测显示，STZ诱导的糖尿病小鼠角膜上皮细胞排列疏松极性逐渐消失，细胞水肿，细胞层数较正常对照小鼠明显减少，基质层纤维增粗排列紊乱。8-OHdG免疫组化检测显示，STZ诱导的小鼠在未刮除角膜上皮和刮除角膜上皮的角膜上皮层和基质层可见其阳性染色，尤其在中央角膜上皮刮除后残存的角膜上皮中表达水平较高，且随着糖尿病病程延长，表达量逐渐升高。透射电镜检测发现，STZ诱导的糖尿病小鼠角膜上皮表面的微绒

4、毛减少，上皮细胞间以及上皮与基底膜间的紧密连接数目明显减少。结论：STZ腹腔注射诱导的糖尿病小鼠角膜，表现出角膜上皮损害，角膜上皮损伤后延迟愈合等症状，说明其可以作为研究糖尿病角膜病变的动物模型。此外，糖尿病小鼠角膜上皮在超微结构和DNA氧化应激损伤方面的异常可能是造成上皮损伤愈合延迟的部分原因。关键词：糖尿病角膜病变；链脲佐菌素；上皮修复；超微结构；氧化应激AbstractPurpose：Tocharacterizethepathogenesisofdiabetickeratopathyinastreptozocin(STZ)i

5、nducedmousemodeloftypeIdiabetesmellitus(DM)．Methods：DiabetesmellituswasinducedviasteptozocinintraperitonealinjectioninC：57bl／6mouse．1％rosebengalWasstainedonthecorneaformeasuringtheintegrityofthecornealepithelium．Cornealepithelialwotmdhealingwasdeterminedusingavivoepit

6、helialdebridementmodelandcomparedwiththeagematchednormalcontrols．CornealmorphologyhistologywereexaminedbvH&Estaining．Oxidativestresswasassessedwithirnmtmohistochemistrywhichmarker8．oHdG．nleultrastructureofthecorneaWasdeterminedwithtansmissionelectronmicroscopic．Result

7、s：Comparedtothenormalcontrolmouse，streptozocinmousehadshowedgeneralsymptomsofdiabetes：polydipsia,polyphagia,polyuria,wei曲tlossetc．STZmousehadasteady-statehigllglucose(18mmol／1)，alSOthegrowthratewaslowercomparedwithnormalcontrolmouse．1％rosebengalcornealstaininghaddotco

8、loringattwoweeksafterSTZinjectionbecomeamodle．thestainedareaandextentweregraduallyincreasedwiththeextensionofthedurationofdi