亚硒酸钠诱导胰腺癌panc-1细胞凋亡及其机制的探讨

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1、温州医学院硕士学位论文亚硒酸钠诱导胰腺癌PANC--1细胞凋亡及其机制的探讨姓名：向俊峰申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：张启瑜2012-11温州医学院硕士学位论文亚硒酸钠诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡及其机制的探讨中文摘要目的：采用不同浓度的亚硒酸钠(SodiumSelenite，Na。SeO。，SSE)作用于人胰腺癌细胞PANC—l，从细胞形态结构、抑制率及凋亡率来研究SSE对人胰腺癌细胞PANC一1的凋亡诱导作用，并通过检测不同浓度SSE作用PANC-I细胞后细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞色素C及C

2、aspase3的变化，探讨SSE诱导PANC一1细胞凋亡与细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞色素C及Caspase的关系，以及在亚SSE诱导PANC-I细胞机制中的作用。方法：通过显微镜观察SSE作用后PANC一1细胞的形态学改变；MTT比色法检测SSE对PANC一1细胞增殖的抑制作用；DNAladder提取电泳观察细胞凋亡DNA的变化；用流式细胞术AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡，并检测细胞内活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位下降比率，酶联免疫吸附法(ELISA)法定量检测Caspase3凋亡相

3、关蛋白，蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测细胞内及线粒体内细胞色素C(CytC)蛋白的表达，荧光定量PCR法检测基因cytC的表达结果：SSE显著抑制人胰腺癌细胞PANC一1生长，并且具有浓度时间依赖性，并随着SSE浓度的增加和作用时间的延长，PANC一1细胞凋亡，坏死率逐渐增加；DNAladder电泳呈明显的梯带状，并伴有拖尾，提示亦伴有大量坏死；MTT比色法显示随着SSE浓度增加和作用时间的延长，对PANC-I细胞的增殖抑制作用亦逐渐增强；AnnexinV-FITC／PI检测发现PANC-I细胞的凋

4、亡率随着SSE浓度增加而逐渐增多；荧光显微镜及流式细胞术观察细胞内活性氧(ROS)水平随着SSE浓度增加而逐渐增加；ELISA定量检测Caspase3含量与SSE水平呈正相关，随着SSE浓度的增加WesternBlot及RT-PCR检测示，细胞内CytC含量无明显变化。结论：(1)SSE具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用，并具有浓度时间依赖性。(2)SSE具有诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡的作用，并具有浓度依赖性。(3)SSE诱导人胰腺癌细胞凋亡的机制可能与产生活性氧(ROS)、降低线粒体膜电位、激活Caspase系统

5、及促使细胞色素C从线粒体的释放有关。关键词：亚硒酸钠；胰腺癌；细胞凋亡；ROS：线粒体膜电位；Caspase：细胞色素C温州1医学院硕士学位论文Ex)erimentalStu&theE—ofSodiumSeleniteongxoerlmentaStudvontheEftbctofSodiumSeleniteonlAOoDtosisofHumanPancreaticCancerCellSAbS仃actObjective：Toobservedtheeffectsofsodiumselenite(Na2Se03，SSE

6、)onhumanpancreaticcancerPANC-1cellsthroughinhibitionrate，apoptosisrateandcellmorphology，tostudythemechanismsofsodiumseleniteinducedapoptosisofhumanpancreaticcancerPANC-lcellsbydetectingthereactiveoxygenspecies，mitochondrialmembranepotential，cytochromeCandcasp

7、ase3changes，Methods：ThecellmorphologychangeofPANC一1cellsaftertreated、航msodiumselenitewasobservedbymicroscopecamera；Proliferation-inhibitedratewasdetectedbYMTTassays．TheDNAchangeswasobservedbyDNAladderextractionandelectrophoresis．TheAnnexinV-FITC／PIdoublestain

8、ingmethodwasusedtodetectcellapoptosis．Theintracellularreactiveoxygenspecies(ROS)wasdetectedbYDCFH—DAwithFluorescencemicroscopyandFlowcytometry．Themitochondrialmembranepotentialwasdetected