融合蛋白d-egf的结构预测、克隆、原核表达及鉴定

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1、分类号R446.19密级学校代码10367UDC577.109,616.9编号学号20096831086融合蛋白d-EGF的结构预测、克隆、原核表达及鉴定Structureprediction,cloning,prokaryoticexpressionandidentificationoffusionproteind-EGF论文类别：学术研究型作者姓名房兵指导教师姓名邵先安副主任技师申请学位级别硕士学位授予单位蚌埠医学院学科专业临床检验诊断学研究方向分子免疫诊断论文答辩时间2012年5月学位授予日期2012年6月答辩委员会

2、主席：论文评阅人：2012年4月1硕士学位论文论文题目：融合蛋白d-EGF结构预测、克隆、原核表达及鉴定Structureprediction,cloning,prokaryoticexpressionandidentificationoffusionproteind-EGF研究生姓名:房兵指导教师:邵先安副主任技师学科专业:临床检验诊断学研究方向:分子免疫诊断论文工作时间:2010年8月至2012年4月2012年6月日2学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行实验研究工作所取得的成果

3、，本论文中不包含其他人已经发表或已经获取得的研究成果。在本论文撰写中所引用其他研究者的研究内容和成果时已在论文中给予特别标注和明确说明。对本论文的研究过程中给予帮助的其他人士，以及论文撰写中所提供的建议等的贡献也已作了致谢说明。本人完全理解本声明的法律责任，以及所涉及的结果将由本人承担。学位论文作者签名：日期：2012年月日关于学位论文著作权共享声明根据《中华人民共和国著作权法》和《高等院校知识产权管理条例》，本学位论文题目：融合蛋白d-EGF结构预测、克隆、原核表达及其活性分析，是研究生在导师指导下完成的职务作品，得到学

4、校相关部门科室的物质技术和经费支持，因此，本学位论文的著作权由研究生，导师和学校共同享有，均享有署名权和使用权等权益；本学位论文成果归属学校。根据国家学位授予条例，学校对本学位论文有使用权，包括保存本学位论文；因教学和科研的目的，保留在图书馆被查阅或借阅；学校可根据国家规定将本学位论文送交国家有关部门保留和使用。学校在公布本学位论文的全部或部分内容时，应保障研究生和导师的署名权等权益。研究生和导师在公开发表本学位论文的全部或部分内容时必须保障学校的署名权等权益，即在发表论文时学校及相关部门科室应署名为作者单位。声明人完全理

5、解本声明的法律责任。研究生签名：导师签名：日期：年3目录一中文摘要…………………………………………………………………………2二英文摘要………………………………………………………………………3三论文正文…………………………………………………………………………5第一部分融合蛋白d-EGF的结构预测及其意义…………………………………61．融合蛋白d-EGF的二级结构预测…………………………………………62．融合蛋白d-EGF的三级结构预测…………………………………………9第二部分融合蛋白d-EGF的克隆及原核表达……………………

6、……………...121．RNA的提取、逆转录……………………………………………………….132．重组质粒pET-SUMOβ-defensin-3、pET-SUMOEGF的构建……………153.重组质粒pET-SUMOd-EGF的构建与鉴定………………………………...204.pET-SUMOd-EGF融合蛋白的诱导表达、纯化…………………………….21第三部分融合蛋白d-EGF的鉴定…………………………………………………..341.融合蛋白d-EGF的Westernblot鉴定……………………………………….352.重组蛋

7、白质d-EGF促Balb/c3T3细胞增殖活性…………………………...363.重组蛋白质d-EGF对金葡菌敏感菌株的抑菌活性………………………...36四结论………………………………………………………………………………41五参考文献………………………………………………………………………...42六致谢……………………………………………………………………………...45七附录……………………………………………………………………………...46A．英中文术语和缩略语对照表……………………………………………..46B．个人简历

8、及发表论文………………………………………………………..47C．综述…………………………………………………………………………..481中文摘要目的：对融合蛋白d-EGF二级、三级结构进行预测并分析其活性部位的可能影响，进行原核表达，并对表达产物进行分析鉴定。方法：以融合蛋白质基因序列为基础，用DNASt