芍药苷对ox-ldl致内皮细胞损伤的干预作用

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1、河南大学硕士学位论文芍药苷对ox--LDL致内皮细胞损伤的干预作用姓名：翟小菊申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：惠学志201205摘要目的：本研究采用氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein，OX．LDL)诱导人冠状动脉内皮细胞(humancoronaryarteryendothelialcells，HCAEC)损伤，建立HCAEC损伤模型，观察芍药提取物芍药苷对内皮细胞损伤的保护作用，并探讨其作用机制，为研发中药保护血管内皮，防治动脉粥样硬化(Atherosclerosis，As)的发生和发展提供科学依据。方法ll、

2、Ox．LDL对体外培养HCAEC的损伤：体外培养HCAEC，用不同浓度的OX．LDL诱导HCAEC损伤24h，进行细胞活性和凋亡率的检测。实验分正常对照组(contr01)、不同浓度的OX-LDL组(浓度依次为25“g／ml、50p∥ml、100ttg／ml和200pg／m1)，用MTr法检测细胞的活性，Hoechst33342／PI双染检测细胞的凋亡率。2、检测芍药苷对内皮细胞的影响：用不同浓度的芍药苷作用细胞24小时，用MTT法检测细胞的活性。3、观察芍药苷对OX．LDL致HCAEC损伤的干预作用：实验分正常对照组、100“g／“OX-LDL损伤组、不同浓

3、度的芍药苷(50¨g／nd、100¨g，Ⅱd和200p咖1)对内皮细胞损伤的干预组(先用芍药苷作用细胞4小时后，再加入100I_,g／mlOX．LDL作用细胞24小时)，用MTT法检测细胞的活性；用Hoechst33342／Pl双染观察细胞凋亡形态学的变化，检测细胞的凋亡率；用相应的试剂盒检测细胞培养上清液中丙二醛(malondialdehyele，MDA)含量、超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)和乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase，LDH)的活性；用荧光探针法检测细胞内ROS和NO的含量变化，用RT．PCR法从

4、基因水平上检测细胞间黏附分子．1(intercellularadhesionmolecule．1，ICAM．1)和血管细胞黏附分子．1(vascularcelladhesionmolecule．1，VCAM．1)的含量变化。探讨芍药苷对OX．LDL致内皮细胞损伤的干预作用及其作用机制。结果：l、Ox．LDL对体外培养HCAEC的影响：不同浓度的OX．LDL与HCAEC共同培养24h，随着OX．LDL浓度的增加，MTT值逐渐降低，各药物组与正常对照组相比，有显著性差异(∥0．01)；荧光显微镜观察Hoechst33342／PI双染细胞形态：随着氧化低密度脂蛋白浓

5、度的增高，凋亡细胞增加并可见染色质凝集，细胞核碎裂等细I胞凋亡的特征性变化，细胞凋亡率逐渐增加，与正常对照组相比有统计学意义(矿，o．01)。2、芍药苷对正常细胞活性的影响：芍药苷与HCAEC共同培养24小时，MTT值没有明显变化，与正常对照组相比没有统计学意义(p>0．05)。3、芍药苷对细胞损伤的干预作用：检测结果显示，不同浓度的PF干预组与OX．LDL损伤组相比，MTT值、SOD活性和NO含量均较OX．LDL组显著增高(刚．01)，LDH、MDA和ROS含量均较对照组显著降低(少，0．01)；荧光显微镜观察Hoechst33342及PI双染可见芍药苷组H

6、CAEC的凋亡率比OX．LDL组明显降低，有统计学意义；逆转录聚合酶链反应结果显示，各组细胞均表达ICAM—l和VCAM．1，OX．LDL组内皮细胞表达的ICAM一1和VCAM—l高于正常对照组p

7、化形成的作用。关键词：人冠状动脉内皮细胞，氧化性低密度脂蛋白，动脉粥样硬化nABSTRACTObjective：Toinvestigatetheprotectiveeffectofpaeoniflorin(PF)oninjuryofHCAECinducedbyox-LDLthroughthedetectionofavarietyofindicators．TostudytheeffectsofPFirIatherosclerosisandthepossiblemechanismofitsantiatherosclerosis．Methods：①theeffect

8、ofdifferentconcentr