缺氧培养epcs移植对缺血性心脏病的治疗作用

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1、分类号：R654.2学校代码：10062密级：学号：20091106博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：缺氧培养EPCs移植对缺血性心脏病的治疗作用TITLEThetherapeuticeffectonischemiaheartdiseasebyhypoxicpreconditioningofendothelialprogenitorcellstransplantation一级学科：临床医学二级学科：外科学胸心外科论文作者：简锴陶指导教师：刘建实天津医科大学研究生院二〇一二年五月万方数据分类号：R654.2学校代码：10062密级：学号：20091106学位

2、类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：缺氧培养EPCs移植对缺血性心脏病的治疗作用TITLEThetherapeuticeffectonischemiaheartdiseasebyhypoxicpreconditioningofendothelialprogenitorcellstransplantation一级学科：临床医学二级学科：外科学胸心外科论文作者：简锴陶指导教师：刘建实导师组成员：天津医科大学研究生院二〇一二年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研

3、究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月

4、日导师签名：日期：年月日万方数据天津医科大学博士学位论文中文摘要目的：通过缺氧培养方法预处理骨髓内皮祖细胞(BM-EPCs,bonemarrowendothelialprogenitorcells)，探讨缺氧培养骨髓内皮祖细胞（BM-HEPCs，hypoxicpreconditionedbonemarrowendothelialprogenitorcells）心肌内移植治疗缺血性心脏病的治疗效果及潜在的分子生物学机制，为临床细胞移植治疗缺血性心脏病提供理论依据和策略参考。内容：以BM-HEPCs为研究对象，观察缺氧培养方法对大鼠BM-EPCs细胞生物学功能的影响和潜在的分子生物学机制

5、；研究基质细胞衍生因子－1α（SDF-1α，Stromalcell-derivedfactor-1α）/CXCR4（CXCR4,CXCreceptor-4）信号通路在BM-HPECs中发挥的作用；探讨BM-HPECs移植后对心室重构、心脏功能和血流动力学的影响；评估其对缺血性心脏病的治疗效果。方法：从8周龄，体重250g～280g的同种系成年雄性Wistar大鼠长骨分离获得大鼠BM-EPCs，Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL,Dil-acetylatedlow-densitylipoproteins)和异硫氰酸盐荧光素标记的荆豆凝集素-1（FITC-UEA-1，fl

6、uoresceinisothiocyanate-lectinfromulexeuropaeus-1）共同染色阳性，细胞表面白细胞分化抗原34（CD，clusterofdifferentiation）/CD133表达阳性。将37℃、5%CO2+21%O2条件下培养至第4天的BM-EPCs，随机分为4组，第一组为常规培养组，37℃、5%CO2+21%O2条件下继续培养3天；第二组为缺氧培养24h组，37℃、5%CO2+21%O2条件下继续培养2天后，放入存满1%O2+5%CO2+94%N2混合气体的培养盒内继续培养1天；第三组为缺氧培养48h组，37℃、5%CO2+21%O2条件下继续培

7、养1天后，放入存满1%O2+5%CO2+94%N2混合气体的培养盒内继续培养2天；第四组为缺氧培养72h组，放入存满1%O2+5%CO2+94%N2混合气体的培养盒内继续培养3天，对以上各组细胞分别进行抗凋亡检测（AnnexinV/PI），细胞迁移实验(BoydenChamberAssay)，血管分化功能检测（MatrigelAssay），实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR,reversetranscriptase-polymerasechainre