酵母双杂交筛选环形泰勒虫p104蛋白相互作用蛋白

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1、万方数据目录第1章引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。l1．1环形泰勒虫病原学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一11．1．1环形泰勒虫的分类地位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．2环形泰勒虫的生活史⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一21．1．3环形泰勒虫的致病机理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．2环形泰勒虫抗原性基因的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．2．1环形泰勒虫子孢子表面抗原蛋白(SPAG．1)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一41．2．2裂殖子表面抗原(Tams)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。51．2．3

2、环形泰勒虫裂殖体表面抗原(TaSP)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51．2．4环形泰勒虫分泌到宿主细胞质中的蛋白(TaSE)⋯⋯⋯⋯⋯⋯一51．2．5热休克蛋白70(HSP70)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．3环形泰勒虫病⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～61．4感染环形泰勒虫的牛淋巴细胞系的分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81．5环形泰勒虫的入侵机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。91．6环形泰勒虫转化牛淋巴细胞机制的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101。7环形泰勒虫微线体一棒状体相关蛋白的研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。1l1．8研究的目

3、的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12第2章环形泰勒虫p104基因全长序列的hiTAIL-PCR扩增⋯⋯⋯142．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142．1．1虫种来源及复苏⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．142．1．2主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。142．1．3主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一142．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．2．1引物的设计与合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．152．2．

4、2hiTAIL-PCff扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．2．3目标序列的鉴定和测序分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．2．4生物信息学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．3．1PCR扩增情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．182．3．2测序结果分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19万方数据2．3．3蛋白信号肽和糖基化位点的预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．3．4蛋白跨膜区的预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯192．3．5棒状体蛋白疏水性的预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202．3．6棒状体蛋白抗原肽的预测_⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．212．3．7棒状体蛋白抗原肽的预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l2．4讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22第3章环形泰勒虫p104蛋白的原核表达和亚细胞定位分析⋯⋯．．233．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯233．1．1细胞株及实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．233．1．2主要实验试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2

6、33．1．3主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯243．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯243．2．1TalM细胞系的培养和该细胞系cDNA的反转录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．243．2．2P104蛋白表达质粒的构建和验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯253．2．3P104蛋白的表达和兔抗p104多克隆抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯．263．2．4抗p104多克隆抗体的Western—blot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．273．2．5间接免疫荧光最佳工作条件的摸索⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯273．2．6亚细胞定位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．3．1环形泰勒虫总RNA的提取和第一条链cDNA合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．283．3．27104表达载体的克隆和验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293．3．3P104蛋白的诱导表达和抗D104多克隆抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯．303．3．4Western-bolt结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．3．5间接免疫荧光最佳工作条件的确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l3．3．6激光共聚焦分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯