木鳖子提取物抑制乳腺癌细胞mda-mb-231增殖的作用及分子机制

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1、第二军医大学硕士学位论文木鳖子提取物抑制乳腺癌细胞MDA--MB--231增殖的作用及分子机制姓名：孟琳懿申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：陶霞201205第二军医大学硕士学位论文摘要目的：探讨ECMS对体外培养的MDA．MB．231细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法：体外培养MDA．MB．23l细胞，选择不同浓度含药培养基与MDA．MB．231细胞共同孵育48h后，应用倒置显微镜观察细胞生长状况，应用荧光显微镜观察Hoechst染色后凋亡细胞形态变化，采用M1vr法检测ECMS对细胞的抑制率、PI／AnnexinV．FITC双染检测细胞凋亡、westernblot法检测

2、相关信号转导通路以及凋亡相关基因的表达。结果：经MTT实验测定，ECMS各浓度对乳腺腺癌MDA．MB．23l细胞的增殖有显著的抑制作用，呈良好的量效、时效关系。ECMS对MDA．MB．231细胞IC50是6511g／ml在72h。我们选用了0，0．1mg／ml，0．2mg／ml，0．4mg／ml四组作为本实验的四个剂量组，作用时间为48h。Hoechst染色后在荧光显微镜下可检测到对照组正常细胞的细胞核呈正常的蓝色弥散均匀荧光，凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，甚至可见DNA荧光碎片，随浓度增加每视野下的凋亡细胞增加。PI／AnnexinV．FITC双染，流式细胞仪下检测细胞

3、凋亡率，ECMS可以诱导MDA．MB．23l细胞凋亡，并随着药物浓度的增大，凋亡细胞的数量逐渐增加。Westernblot显示ECMS剂量增加可下调P13K／AKT和NF．KB信号通路的基因蛋白表达。ECMS处理MDA．MB．231细胞会导致Cdkl和CyclinB1表达的减少。用药后，随浓度增加BCL．2基因蛋白表达减少，BAX，CASPASE．3表达增加，浓度为0．4mg／ml时，与对照组相比，差异性显著(p<0．01)。结论lECMS对乳腺癌细胞MDA．MB．231具有抑制其增殖的作用，其抑制作用具有剂量依赖性：ECMS可能是通过下调人乳腺癌MDA-MB-231细胞中P13K／Akt和

4、NF．KB信号传导来诱导G2／M的阻滞和凋亡的。关键词：ECMS，MDA．MB．23l，凋亡，基因．4-木鳖子提取物对乳腺癌细胞MDA．MB．23l凋亡作用机制研究AbstractCochinchinamomordicaseedsareakindoftraditionalChineseherb．Inthisstudy,anticanceractivityandunderlyingmechanismswereinvestigatedwithanextractusinghumanbreastcancerMDA··MB-·231cells．Thesurvivalratewasreducedinac

5、oncentration—andtime．dependentmannerasassessedbyMTTassay．Afterincubationfor48h，typicalapoptoticmorphologicalchangeswereobservedbyHoechg33258dyeassay．FlowcytometryrevealedthatthetreatmentobviouslyinducedG2／MarrestandapoptosisinMDA-MB-231cells．Furthermore，westernblottingdemonstrateddownregulationofpr

6、oteinexpressionofP13K,Akt，NF．r,B，Bcl-2，CdklandcyclinB1，whereasBaxandcaspase-3wereupregulated．OurresultssuggestthattheextractinducedcellcycleG2／MarrestandapoptosisinMDA··MB--231cellsbydecreasingP13K／Aktpathway．Therefore，weproposethatECMShaspotentialasabreastcancerchemotherapeuticagent．Keyword：ECMS，M

7、DA·MB-231，Apoptosis，Gene．5．第二军医大学硕士学位论文第一章前言乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，近年来我国乳腺癌的发生率迅速上升，发病率正以每年2％．3％的速度递增，10年间我国主要城市的乳腺癌发病率增长了37％。特别是在30．54岁年龄组中，乳腺癌己成为威胁女性健康的“头号杀手”自20世纪70年代末开始，乳腺癌的发病在全球范围内居女性肿瘤的首位，死亡率占第四或第五位，发