犬白细胞介素-7基因对犬细小病毒dna疫苗的免疫增强作用

《犬白细胞介素-7基因对犬细小病毒dna疫苗的免疫增强作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北农业大学硕士学位论文犬白细胞介素--7基因对犬细小病毒DNA疫苗的免疫增强作用姓名：孙岩申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：仲飞20120531摘要【目的】细胞因子具有明显的免疫佐剂作用，它通过在体内缓慢持久的释放，从而增强疫苗的免疫作用。白介素一7是动物体一种重要的多功能细胞因子，白介素．7作为白介素家族的一名重要成员它不仅在促进B细胞、T细胞的形成和发育中起重要作用，而且在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥着重要作用。为了验证白介素．7基因对DNA疫苗的免疫增强作用，本试验利用犬细小病毒VP2DNA疫苗与重组犬白介素一7DNA疫苗共同免疫小鼠

2、，在小鼠体内分析了犬白介素．7(clL一7)基因的免疫增强作用。【方法】首先从犬脾脏中分离出犬脾淋巴细胞，然后用conA刺激犬脾淋巴细胞，利用Trizol法提取犬。营,RNA，并翻转录成cDNA，RT-PCR扩增出clL．7基因，然后将clL．7基因插入到真核表达载体pcDNA3．1A中，分别构建成与Myc／His标签融合和非融合的clL．7真核分泌型表达载体pcDNA．clL7／MH和pcDNA．clL7。将构建好的融合标签表达载体pcDNA．clL7／MH质粒利用磷酸钙转染法转染HEK293T细胞，使其进行瞬时表达，同时将pcDNA3．1空载体转染HEK293T

3、细胞作为对照。培养48d,时后，收集培养基利用三氯乙酸沉淀法沉淀蛋白，以Western-blot检测构建的表达载体能否介导elL．7基因在真核细胞中进行分泌表达。然后用本室之前已经构建好的VP2表达载体pcDNA．CD5．VP2与非融合标签的pcDNA．clL7载体共免疫小鼠，并设pcDNA3．1、pcDNA—CD5．VP2单免疫小鼠和pcDNA．clL7单免疫小鼠作为对照，免疫小鼠方法采用肌肉注射方法，DNA质粒用DNA无内毒素试剂盒抽提，将抽提好的DNA质粒注入小鼠的后腿肌肉。小鼠共进行免疫两次，第二次免疫在第一次免疫后14d进行。免疫后，分别在两次免疫前2d和

4、一免后35d，从小鼠眼角进行活体采血，分离血清。通过ELISA方法检测抗体水平，并通过淋巴细胞增殖实验和ELISA方法分别检测免疫后35d小鼠脾脏淋巴细胞刺激指数和Y．干扰素的表达水平。【结果】结果表明，本实验扩增的elL．7基因序列与GenBank中犬的序列完全一致。构建的表达载体能够介导clL．7基因在HEK293T细胞中进行分泌表达。动物免疫试验结果显示，elL一7与VP2共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价分别极显著和显著高于VP2单免疫组(P<0．01和P<0．05)；共免疫组小鼠淋巴细胞刺激指数和Y．干扰素表达水平也显著高于VP2单免疫组(P<0．0

5、5)。【结论】由此可见，clL．7基因可增强小鼠对VP2DNA疫苗的免疫应答反应。关键词：犬IL一7；细小病毒；VP2基因；DNA疫苗ImmuneEnhancingEffectsofCanineInterleukin一7GeneonCanineParvovirusDNAVaccineAuthor：．SunYanMajor：．BasicVeterinaryMedicineSupervisor：．Prof．ZhongFeiAbstract[Objective]Cytokineimmuneadjuvanteffect，byslowandsustainedreleasein

6、thebody．therebyenhancingtheimmunefunctionofthevaccine．Animalinterleukin一7(IL一7)，amulfifuncfionalcytokine，interleukin．7asanimportantmemberoftheinterleukinfamily,itisnotonlyplaysanimportantroleinB—andT-cellgenerationanddevelopmentandinimprovementofanimalimmunecapacitycoordinatingwithothe

7、rcytokines．Inordertoverifytheinterleukin7geneDNAvaccineenhancedrole，ThestudyuseingcanineparvovirusofVP2DNAvaccineandrecombinantcanineinterleukin一7(clL一7)DNAvaccinecommonimmunemice．toinvestigatetheimmuneenhancingeffectsofcanineIL-7(clL．71geneCO．immunizedwithexpressionvectorsofcaninepa