水杨酸对人角质形成细胞丝聚蛋白和激肽释放酶7表达的影响

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1、水杨酸对人角质形成细胞丝聚蛋白和激肽释放酶7表达的影响计：学位论文：29页表格：1个插图：9幅赵丹指导教师：涂彩霞教授申请学位级别：硕士学位．专业名称：皮肤病与阻病学论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明／I磁IIIIl81219117171本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使

2、用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：雄．签字日期：垃年丘月逸日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10(四)讨论⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l9(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29水杨酸对人角质形成细胞丝聚蛋白和激肽释放酶7表达的影响硕士生姓名：指导教师：指导小组：专业名称：赵丹涂彩霞教授皮肤病与性病学摘要背景和目的：特应性皮炎(atop

4、icdermatitis，AD)是一种较常见的皮肤病，特点为出现不同程度的皮肤瘙痒、干燥脱屑及炎症反应。越来越多的研究表明皮肤屏障功能异常在特应性皮炎的发病机制中具有重要作用。丝聚蛋白(FLG)是完整的皮肤屏障和表皮水化功能必不可少的分化蛋白。FLG的缺乏及基因突变可以破坏皮肤屏障，引起皮肤干燥而导致瘙痒，变应原易于进入。人组织激肽释放酶7(KLK7)的作用是参与皮肤细胞脱落过程，同时在其他的皮肤病理生理学如角化，炎症等过程中发挥作用。特应性皮炎KLK7表达水平明显增高，引起脱屑及瘙痒。本研究通过测定不同浓度的水杨酸对人角质形成细胞中FLG和KLK7的影响，探讨水

5、杨酸对表皮屏障功能的影响，从而为临床上水杨酸对治疗特应性皮炎提供实验依据。方法：不同浓度的水杨酸作用于人角质形成细胞(HKC)24h，采用MTT法检测人角质形成细胞的细胞存活率以确定水杨酸的无毒剂量。在无毒剂量范围内，采用不同浓度的水杨酸(50099／ml、5099／ml、599／ml、0．5119／m1)作用于HKC，并设立空白对照组(用培养基代替药物)，培养24h后收集细胞或上清液，分别用S-P免疫组化方法检测人角质形成细胞中FLG的表达水平，用ELISA方法检测HKC上清液KLK7的水平，用RT．PCR方法检测FLG和KLK7mRNA的表达水平。各组数据采用

6、单因素方差分析进行统计学比较。结果：1．MTT法检测水杨酸对HKC生存率的影响：200099／ml，100099／ml的水杨酸浓度作用HKC24h的存活率分别为28．37％和71．16％，与阴性对照组(100％)相比明显降低(P<0．01)；50099／ml，50rtg／ml，599／ml，O．5_tg／ml的水杨酸作用于HKC24h后的存活率分别为98．04％，97．93％，98．28％，99．1％，均>95％，与阴性对照组(100％)相比无显著差异(胗O．05)。因此，后续实验水杨酸的浓度确定为50099／ml，5099／ml，599／ml，0．599／ml。

7、2．S-P免疫组化方法检测水杨酸对HKC中FLG表达的影响：与阴性对照组(430．996士96．979)相比，四个浓度(5009#ml、5099／ml、59∥ml、O．59∥m1)的水杨酸对HKC细胞FLG的表达均有促进作用(1520．476士37．807，3627．906+228．503，1590．677士166．396，808．073+154．108)，差异具有统计学意义(尸<0．01)。3．RT．PCR方法检测水杨酸对HKC中FLGmRNA表达的影响：与阴性对照组(7760+74．746)相比，四个浓度(5009∥ml、50心ml、59∥ml、O．5pg／m

8、1)的水杨