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《慢病毒转染人角质形成细胞高表达核纤层蛋白b1》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、慢病毒转染人角质形成细胞高表达核纤层蛋白B1李睿夫，彭代智，钱卫，王丽华，何斌，刘小玲，舒文婷，刘潇，周新，刘敬（400038重庆，第三军医大学西南医院全军烧伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室）［摘要］目的通过对慢病毒载体稳定转染人角质形成细胞（HaCaT）株和未转染HaCaT细胞进行比较蛋白组学分析，找出其差异表达蛋白，寻找基因修饰组织工程表皮种子细胞生长特性改变的原因和可能存在的成瘤性安全隐患。方法选择慢病毒载体稳定转染后生长特性发生明显改变的转染株细胞，采用二维电泳技术对该转染株和未转染株的总蛋白进行分离和比较，找出差异表达蛋白点
2、，再进行串联质谱鉴定。从鉴定得到的差异蛋白中选择可能与细胞生长特性改变和肿瘤生成相关的核纤层蛋白B1（laminB1）采用蛋白质印迹（WB）和实时荧光定量PCR技术（qPCR）对其表达差异进行验证。结果与未转染株比较，转染株在二维电泳中存在11个差异表达蛋白点，质谱从其中鉴定出7个蛋白质。选取其中与细胞增殖和凋亡相关的核纤层蛋白B1通过WB和qPCR证实其在转染株中蛋白和转录水平均存在明显的高表达。结论慢病毒载体稳定转染株HaCaT细胞株相对未转染株核纤层蛋白B1高表达。这种高表达可能与转染株细胞生长特性改变和潜在的成瘤性隐患相关。［关键词］人
3、角质形成细胞；慢病毒；蛋白组学；核纤层蛋白B1［中图法分类号］R739.5；[R34]［文献标志码］ATheoverexpressionoflaminB1inlentiviralvector-infectedhumanimmortalkeratinocytelineLiRuifu，PengDaizhi,QianWei,WangLiLua,HeBing,LiuXiaoling,ShuWenting,LiuXiao,ZhouXin,LiuJing(InstituteofBurnResearch,SouthwestHospital,StateKeyL
4、aboratoryofTrauma,BurnsandCombinedInjury,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,40038,China)［Abstract］ObjectiveTofindoutthecauseofalteredgrowthcharacteristicsandthepotentialthreatoftumorigenicityinlentiviralvector-infectedhumanimmortalkeratinocyteline(HaCaT).MethodsLentivi
5、ralvector-infectedHaCaTcellwithsignificantchangeofgrowthcharacteristicsanduninfectedHaCaTcellwerechosenasexperimentalandcontrolcelllines,respectively.Thedifferentiallyexpressedproteinsbetweenthemwererevealedbytwo-dimensionalelectrophoresisandfurtheridentifiedtheseproteinsbyL
6、C-MS-MS.LaminB1,whichiscloselyrelatedtotumorigenicity,cellgrowthandcellcycle,waspickedoutfromtheseproteinsanditsdifferentialexpressionsatproteinandmRNAlevelswerevalidatedbywesternblot(WB)andquantitativePCR(qPCR).ResultsBetweenthesetwocelllines,11differentiallyexpressedprotei
7、nswerefoundbytwo-dimensionalelectrophoresisand7proteinsincludinglaminB1wereidentifiedfromthembyLC-MS-MS.Furthermore,increasedexpressionoflaminB1proteininlentiviralvector-infectedHaCaTcellwasprovedbyWBaswellasitsmRNAexpressionbyqPCRanalysis.ConclusionThereisanoverexpressionof
8、laminB1proteininlentiviralvector-infectedhumanimmortalkeratinocyteline.Itma
