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1、P物质受体在人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2005Jun;21(6):667-70.667?
P物质受体在人表皮角质形成细胞和
真皮成纤维细胞中的表达调控
刘继勇,胡晋红,朱全刚
(第二军医大学长海医院药学部,上海200433)
中国图书分类号:R332.99;R329.2;R392.11;R394.2;
R758.2;R977.6
文献标识码:A文章编号:1001—1978(2005)06—0667—04
摘要:目的考察P物质受
2、体(Neurokinin一1R,NK一1R)在正
常人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控特
征.方法培养人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞和真皮
成纤维细胞,应用免疫组织化学法检测NK一1R在两种细胞
中的表达;采用RT-PCR方法检测NK一1R在两种细胞mRNA
水平的表达特征,并采用流式细胞术定量检测在不同刺激因
素及药物作用下两种细胞中NK一1R的表达调控情况.结果
NK-1R在HaCaT细胞及真皮成纤维细胞中均有表达,阳
性部位位于细胞膜及细胞质.NK一1RmRNA在HaCaT细胞
上的表达水平要高于
3、在真皮成纤维细胞上的表达.P物质
和IFN一可以上调NK一1R在两种细胞上的表达,而LPS抑
制了NK一1R的表达;抗组胺药盐酸西替利嗪和P物质受体
特异性拮抗剂SpantideI可以降低两种细胞上NK.1R的表
达.结论皮肤角质形成细胞和真皮成纤维细胞在细胞,蛋
白及mRNA水平均有NK一1R的表达,而且这种表达可被过
敏炎症因子调控,提示角质形成细胞和真皮成纤维细胞参与
了皮肤免疫调控,神经肽P物质可能在皮肤过敏性炎症中起
重要作用.
关键词:表皮角质形成细胞;HaCaT细胞;真皮成纤维细胞;P
物质受体;皮肤炎症
4、
皮肤是人体最大的器官,由表皮,真皮和皮下组
织构成.近年来,皮肤的免疫功能逐渐受到了研究
人员的重视.皮肤细胞主要包括树突状细胞(den—
driticcells),朗格罕细胞(Langerhanscells),黑色素
细胞(melanocytes)等,这些细胞在皮肤免疫和皮肤
收稿日期:2004—10—11,修回日期:2004—11—17
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No30271553),军队医药卫
生”十五”重点资助项目(NoOlZ66)
作者简介:刘继勇(1976一),男,博士生,研究方向:皮肤药理学
5、,Tel:
021-25070674,E—mail:liujiyong999@yahoo.corn.cn:
胡晋红(1949一),女,教授,博士生导师,研究方向:皮肤
药理学,Tel:021-25070665,E—mail:hujh@SnllnU.edu.cn
炎症中的作用已得到了深入研究J.但对于占表
皮组成约95%的表皮角质形成细胞(keratinocyte)
和构成真皮的主要细胞真皮成纤维细胞(Fibro—
blast)在皮肤免疫和皮肤疾病中的作用却少有报道.
P物质(substanceP)是一种高活性的神经肽类
6、物
质,通过与高亲和力的神经肽受体(Neurokinin一1R,
NK一1R)结合或直接激活细胞内的G一蛋白级联反应
作用于皮肤细胞,从而调节皮肤免疫和炎症反应,在
神经一内分泌一皮肤免疫系统网络中具有重要作
用.
本研究采用由人腹部表皮衍化而成,具有与正
常人表皮角质形成细胞相似分化特征的HaCaT细
胞株和真皮成纤维细胞为工具,研究P物质受体在
这两种细胞上的表达及不同刺激因素的调控情况,
为深入阐明神经源性因素在皮肤免疫和皮肤炎症中
的作用提供依据.
1材料与方法
1.1药品与试剂盐酸西替利嗪(Cetirizin
7、eHydro—
chloride,江苏联环药业股份有限公司,纯度
99.6%);SpantideI(Sigma公司);LPS(Sigma公
司);IFN一(PeproTechECLtd公司);SubstanceP
(SP,Sigma公司).NK一1R山羊多克隆抗体(Santa
Cruz公司);HRP一兔抗山羊二抗(DAKO公司);DAB
显色试剂盒(武汉博士德公司);兔抗山羊IgG—FITC
(武汉博士德公司);人角质形成细胞无血清培养基
(K—SFM,Gibco/BRL公司);DMEM培养基(Gibco/
BRL公司
8、);新生牛血清(杭州四季清生物制品公
司);小量柱离心式组织/细胞总RNA抽提试剂盒
(上海华舜生物工程有限公司);RT—PCR试剂盒
(宝生物工程大连有限公司).
1.2仪器流式细胞仪(FACS,美国Becton—Dick—
son公司),Tgradient96梯度聚合酶联反应仪(德国
Biometra公司),FR-980生物电
