资源描述：
《基于液质联用技术解析和降低螺旋霉素发酵杂质》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、基于液质联用技术解析和降低螺旋霉素发酵杂质21卷2期2005年3月生物工程Ch#wseJournalofBiotechnologyVol.21No.2March2005基于液质联用技术解析和降低螺旋霉素发酵杂质LC-ESI/MSIdentificationandReductionOflmpuritiesinpiramycin.ermentauon华东理工大学牛物反应器工程国家重点实验室,上二海200237河南天方药业股份有限公司，河南463003ECUSTStateKe)LaboratoryofBioreactorEngineering,Shanghai200237,China
2、HenantopfondPharmaceuticalCO,Ltd,Henan463003,China摘要0前螺旋霉素生物合成的发酵杂质含量过高，导致成品收率过低，杂质含量不符合药典规定:为解决这一问题•首先利用LC-MS联用技术定性分析了4种螺旋霉素发酵杂质的结构，结合螺旋霉素生物合成途径分析，它们部起因于螺旋霉素生物合成糖基化过程的紊乱•氯源尤其是较盐对螺旋霉素生物合成糖基化过程有重要的调节作用.进--步的氯源优化使螺旋霉素发酵液中4种杂质含量降低22%〜88%,杂质含量全部低于欧洲药典标准.关键词液质联用，螺旋霉素，杂质，优化中图分类号TQ92文献标识码A文章编号1000.
3、3061(2005)02.0275—04AbstractThereareseveralimpuritiesinthespiramyeinfeixnentationbrothwhichleadstoaloweryieldandlowerqualityoftheproduct.FourimpuritiesinspiramycinbrothhavebeensimuhaneouslyseparatedandidentifiedbyLC一ESI/MS.Thegenerationoftheseimpuritieswasattributedtothefluctuationofglueosyl
4、ationinspiramycinbiosynthesis-Nitmgensources.ammoniuminpar一titular,wereNundtoplayanimportantroleattheglucosylation.AidedwiththeinfoixnationofLC一ESI/MSanal?'sisandsubse—quentoptimizationoftheculturemedium.betterculturemediumofshakeflaskwasdesigned,whichleadstoreductionofimpuri—tiesby22%〜88%.K
5、eywordsLC一ESI/MS.spiramyein,impurity,optimization抗生素的生物合成属于产生菌的次级代谢，具有生物合成途径复杂，生物合成酶的基质特异性不高及调控机制不严密等特点•在产生菌的发酵液中,存在结构相近但牛物活性相差很大的多种组分，获得生物活性高，毒性小的有效组分，对提高抗生素质量至关重要•另一方面,抗生素等原料药的出口受到各国药典越来越严格的质量要求.2001版欧洲药典规定，螺旋霉素原料药的成品主成分不能低于85%,各杂质不能高于2%•现存螺旋霉素牛Received:Septenfi-er2,2004;Accepted:October12
6、,2004^Correspondingauthor.Tel:86——21——64252324:E——maikleey〜@chinacorn.cu产工艺屮，发酵液屮的4种杂质在后处理屮无法用常规分离手段去除,口含量高于2%电喷雾离子化(ESI)及其色谱一质谱联用(LC—MS)可有效地分析复杂混合物中的单个或多个组分.国内外亦有利用LC—MS联用技术分析发酵液屮多组分的报道・・：本研究旨在利用LC-MS联用技术分析螺旋霉素发酵液中4种杂质的结构，结合螺旋霉素牛物合成途径分析杂质产牛机理和原因,进而指导工艺优化以降低其含量:YXF卜Y蝴李月嗡熠h顾,E匕，陈兀友Y李==j276Chi
7、neseJournalofBiotechnology生物工程2005,Vol.21,No.21材料与方法1.1材料和试剂牛二素链霉菌(Streptomycesspiramyceticus)SPMl一175,由河南天方药业有限公司提供.1.2液质联用仪器及条件流动相A为0.05mol/L的乙酸钱溶液;流动相B为乙腊:甲醇(5:1/V:V).流动相配比见表1,其他条件同文献[4].表1流动相配比梯度程序Table1CompositionofmobilephaseSolventA:ammonium
