液质联用技术在药物杂质结构分析中的应用

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1、液质联用技术在药物杂质结构分析中的应用——毗格列酮杂质结构分析（雍春310011）［摘要］目的：要求对毗格列M4.800min杂质・A（相对保留时间为RRT=0.55）和7.550niin（相对保留时间为RRT=0.87）杂质・B进行研究，确定其结构。方法：通过对杂质的提取提高杂质的含量，通过液质联用技术对杂质进行结构分析。结果：成功地确认了多个研究杂质的结构。关键词：杂质提取液质联用技术结构分析在药物质量研究中，有机杂质的研究成为制约药物深入研究的重点及难点。随着液质联用技术的广泛应用，液质联用技

2、术越來越成为药物杂质结构研究的有力手段。本文通过对杂质一系列的有效捉取，提髙了杂质的含量，同时捉高了其在质谱多级裂解中的响应，并通过液质联用技术成功地确认了多个研究朵质的结构。一、杂质研究冃的要求要求对毗格列酮4.800min杂质・A（相对保留时间为RRT=0.55）和7.550min（相对保留时间为RRT二0.87）杂质-B进行研究，确定其结构。（附图1）二、仪器及试药仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，质谱仪，旋转蒸发仪试药：乙醇（分析纯），正己烷（分析纯），正丁醇（分析纯），醋酸（分析

3、纯），乙腊（色谱纯），氨水（分析纯），水（重蒸水）。三、杂质的提取毗格列爾氢化母液（附图2）旋转蒸发浓缩毗格列酮滤液（含4.6min杂质A约3.6%）减压旋转蒸发二氧六环母液样品J乙醇溶解（加正己烷萃取杂质-D提取液正己烷层（上层）含6.9min杂质-D可高达54%（附图3）（旋转蒸发除去乙醇稠状物J正丁醇溶解｛用水萃収2〜3次III上层为有色层（有机层）收集下层水层I（加少量正丁醇萃取2次，可除去绝大部分的3.5min杂质-C。飞质・A提取液4.6min杂质・A含量可达约30%。（附图4）"四、杂

4、质的结构分析分析色谱条件1：色谱林：依利特HypersilODS2250X4.6mm5pm流动相:乙睛冰•醋酸=500：50（）：1.2（用氨试液调节pH6.0）分析色谱条件2：色谱柱：依利特HypersilODS2250X4.6mm5pm流动相：乙腾水酬酸=420：580：0.9（用氨试液调节pH6.2）LC-MS分析色谱林均为依利特HypersilODS2250X4.6mm5pm1、峰位的确认及分了量初步分析（LC・MS分析）：取毗格列酮样品分别于色谱条件1和色谱条件2卜•进样分析，并取毗格列酮

5、样品于色谱条件2卜-进行LC-MS分析。结果见下表1。表1杂质的出峰位直的确认及分子量初步分析（LC-MS分析）色谱条件成分保留时间（RT）相对保留时间（RRT）分子量色谱条件1杂质A4.669min0.57/（附图5）杂质B7.177min0.88/色谱条件2（附图6）杂质A6.734min0.45/杂质B12.432min0.84/色谱条件2LC-MS（图7）杂质A6.296min0.45298杂质B11.563min().833262、母液的LC-MS分析：取毗格列酮母液于色谱条件1下进行色谱

6、分析，在梯度条件下进行LC-MS分析，结果见下表2。表2母液的色谱分析和LC-MS分析色谱条件成分保留时间（RT）相对保留时间（RRT）分子量色谱条件1（附图2）杂质A4.694min0.56/杂质B7.276min0.87杂质D7.507min0.90LC-MS分析（梯度洗脱）（附图8）杂质A7.186min0.56298杂质B13」43min1.03326杂质E8.283min0.65257杂质D11.6力min0.91135由于LC-MS色谱系统的变化（如调节流动相pH误差较大）会使出峰时间顺

7、序发生变化，这在毗格列酮分析方法学研究中得到证实，所以LC-MS中分了虽为326保留时间为13.143min的杂质应为图2屮7.276min杂质B。3、样品及杂质LC-MS/MS分析：（1）对毗格列酮050602批样品的分析：取毗格列酮050602批样品于色谱条件1下进行液相色谱分析，并进行LC-MS/MS分析，结果见下表3。表3I此格列酮050602批样品的色谱分析和LC-MS/MS分析色谱条件成分保留时间（RT）相对保留时间（RRT）分子量色谱条件1（附图9）杂质A4.688min0.56杂质B

8、7.268min0.87杂质E6.720min0.81LC-MS分析（流动相为乙睹-水-冰乙酸=450：550：1.2（用氨试液调节pH6.0））（附图10）杂质A6.081min0.62298杂质B主峰后/326杂质E7.038min0.72257根据样品图中三个主要杂质和对应，并结合前面分析可以推测出图10中7.038min质量数为257杂质即为图9中6.720minRRT=0.8072杂质E；图10屮主峰后质虽数为326杂质即为图9中7.268min杂质B。7.