乳腺癌shp-1基因甲基化状态及其对细胞增殖与凋亡的影响

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1、乳腺癌SHP,1基因甲基化状态及其对细胞增殖与凋亡的影响计：学位论文：37页表格：4个插图：7幅王琨指导教师：赵作伟教授申请学位级别：硕士学位专业名称：外科学论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明I恍㈣掣必本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其

2、他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：羔衄签字日期：出二扫三日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)丹!J舌⋯⋯“”⋯”“⋯”⋯”⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯””⋯’(二)第一部分乳腺癌细胞中Sm．1基因的甲基化状态材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···1l讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(三)第二部分：5．氮杂胞苷对S唧一1基因去甲基化作用的研究材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一16讨{仑·⋯⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯·⋯··⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯··20(四)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(五)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23三、综述⋯⋯⋯⋯⋯OOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯小⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37乳腺癌SHP-1基因甲基化状态及其对细胞增殖与凋亡的影响硕士生姓名：王琨指导教师：赵作伟教授专业名称：外科学摘要目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在全球

5、范围内呈逐年上升的趋势。尽管在乳腺癌的早期诊断和治疗等方面我们取得了一定的进展，但全球每年仍有约50万的女性死于乳腺癌，目前乳腺癌发病率已位居女性恶性肿瘤首位。近年来随着环境、生活方式的变化、生活水平的提高以及饮食结构改变等原因，我国乳腺癌的发病率也呈逐年上升趋势，严重危害着广大女性的心身健康和生活质量。肿瘤的发生、发展是不同致癌因素通过不同的途径激活原癌基因和(或)使抑癌基因失活导致细胞增殖和凋亡失调所致。目前对表观遗传学的重要研究内容为DNA甲基化，认为人类的发育和肿瘤疾病的发生与DNA甲基化有着密

6、切关系，特别是CpG岛甲基化异常状态所致的抑癌基因失活及癌基因激活问题。最近研究证明，乳腺癌中基因表型的改变，在肿瘤的发生与发展过程中起到重要作用，特别是抑癌基因DNA的甲基化表达异常，被称为是重中之重。SHP一1基因是近年来发现的抑癌基因，是众多蛋白酪氨酸激酶之一，主要表达在造血细胞中被称为造血细胞磷酸酶(hematopieticcellphosphatase)也称HCP。SHP一1蛋白有去磷酸化作用，可以调节细胞内信号蛋白分子酪氨酸的磷酸化水平，抑制细胞的增殖、分化和活性。虽然SHP一1基因对肿瘤的

7、抑制功能已经被证实，但其在乳腺癌细胞中作用机制是怎样产生作用的仍不十分清楚，其表达的调控机制等也尚未完全明确。本研究以乳腺癌MCF一7细胞系为研究对象，检测乳腺癌中SHP-1基因的甲基化状态，并对MCF-7细胞系进行去甲基化干预，观察肿瘤细胞SHP-1基因对MCF-7细胞系增殖和凋亡的影响，探讨SHP一1基因甲基化在乳腺癌发生发展中的作用，为乳腺癌的诊断和治疗提供新的依据和方向。方法：④用甲基化特异性PCR(methylation-specificPCR，MSP)和非甲基化特异性PCR(unmethyl

8、ation—specificPCR，un—MSP)检测SHP—l启动子区域CpG岛甲基化状态，MSP、U13一MSP方法分别检测接受和未接受去甲基化处理的乳腺癌MCF-7细胞系SHP-1的甲基化状态②用RT-PCR法检测用药前后细胞中SHP—l基因mRNA表达水平的变化@CCK-8测定不同剂量(0．1，1，5，10，20nmol／L)甲基化抑制剂5一氮杂胞苷(5一Azacytidine)作用MCF-7细胞1，3，5天时对MCF一7细胞增殖能