黄连解毒汤对体内外损伤的神经保护作用

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1、温州医学院硕士学位论文黄连解毒汤对体内外损伤的神经保护作用姓名：黄春燕申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：俞月萍；张琦2012-05-16温州医学院硕士学位论文黄连解毒汤对体内外损伤的神经保护作用摘要目的(1)建立一种同时测定黄连解毒汤(Huanglian．Jian．Du．Tang，HJDT)中7种活性成分(栀子苷、黄芩苷、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素)含量的RP．HPLC方法，为其后续研究工作和其多种指标性成分的质量控制提供依据。(2)观察HJDT对体外糖氧剥夺(oxygen-glucosedeprivation，OGD)和谷氨酸诱导

2、PCI2细胞损伤及体内小鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法(1)采用迪马DiamonsilC18色谱柱(250x4．6mm，5“m)，以乙腈(A)．0．05％磷酸二氢钾和0．05％三乙醇胺(用磷酸调pH到3．0)(B)为流动相，梯度洗脱：O～9min，84％B；9---27min，84％_73％B；27"～35min，73％-÷70％B；35～39min，70％—}68％B：39～42min，68％_60％B；42---46min，60％—÷52％B；46"～53min，52％_45％B；53"-一60min，45％—÷84％B。流速0．8mL·min～，检测

3、波长254nlTl，柱温35。C。(2)体外建立OGD和谷氨酸诱导的PCI2细胞损伤模型，分别给予不同浓度的HJDT作用一定时间，以MTT和LDH法观察HJDT对细胞损伤的保护作用。体内采用双侧颈总动脉阻断30min建立C57BL／6小鼠全脑缺血模型，术前7d开始灌服HJDT(1、2、4、8g'kg’1)至术后3d，采用新奇事物探究实验检N4,鼠学习记忆能力，采用Nissl染色观察神经元存活的情况。结果(1)在60min内黄连解毒汤中栀子苷、黄芩苷、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素7种成分被完全分离；回归方程显示7种成分的峰面积与其浓度呈良好的

4、线性相关；7种成分的加样回收率(n=6)为96．42温州医学院硕士学位论文％～105．21％，RSD均小于2．0％。(2)OGD4h复灌2h后，HJDT(4．0x10一、4．0×10‘4、4．0×10．3mg．mL‘1)可显著增加PCI2细胞活性，(4．0×10一、4．0×10～、4．0x10。4mg·mL。1)减少LDH释放(P

5、、4g-kg。)可显著提高小鼠海马CAl区的神经元密度。结论(1)利用反相高效液相色谱法，建立了一种简便准确，可同时测定黄连解毒汤中7种活性成分含量的检测方法，为后续研究工作和其多种指标性成分的质量控制提供依据。(2)HJDT对OGD和谷氨酸诱导PCI2细胞损伤及全脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。关键词：黄连解毒汤；反相高效液相色谱法；含量测定；PCI2细胞；氧糖剥夺；谷氨酸；全脑缺血4温州医学院硕士学位论文Neuro—protectiveEffectsofHuanglian—Jian-Du—TangObjectiveZ刀l，zf7移andinVlVO■■』1

6、●ABSTRACT(1)TodevelopaRP—HPLCmethodtodeterminatesevenactivecomponents(geniposide，baicalin，palmatine，berberine，wogonoside，baicaleinandwogonin)inHuanglian_Jie—Du-Tang(HJDT)，whichprovidesthebasisforqualitycontrolofitsfollow-upresearchworkandavarietyofindicatorscomponents(2)Theneuro-prot

7、ectiveeffectsofHJDTonischemicinjuryinducedbyoxygen—glucosedeprivation(OGD)andglutamateinPC12cellsinvitroandontransientglobalcerebralischemiainmiceinvivoMethods(1)ThesampleswereseparatedonaDiamonsilC18column(250x4．6ITllTI，5¨m)byalineargradientelution(O～9min，84％B；9-、一27min，84％—÷73％B；27

8、"～35min，73％—