黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究论文

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1、黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究论文.freelg/kgD-Galn腹腔注射造模，空白组则以等量NS腹腔注射；造模后立即对中药组给予相应浓度中药10ml/kg灌胃.freelg/kgD-Galn诱导的大鼠急性肝损伤，黄连解毒汤干预24h后，有一定的治疗作用。【关键词】黄连解毒汤急性肝损伤D-氨基半乳糖胺量效关系黄连解毒汤方出自《肘后备急方》，名见《外台秘要》，由黄芩、黄连、黄柏、栀子四药组成，有清热燥湿、泻火解毒的功效，主治三焦火毒证，尤其对热毒炽盛证型的急性肝炎，有一定的临床效果1。有学者已对该复方进行了研究2，但为预防性研究，与临床实际应用有一定的差距。本实验重点观察该方

2、对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用。1材料与方法1.1材料1.1.1药物：D-氨基半乳糖（D-galactosanine,D-Galn）由sigma公司提供，批号7499531，黄连解毒汤的四味药材为中药免煎剂型，购自成都中医药大学附属医院中药房，各药物的剂量比遵守《肘后备急方》原方比例，以蒸馏水煮沸冲为不同浓度的中药汤剂，其中低剂量组(T1组)浓度为0.49g/ml，高剂量组（T2组）浓度为0.99g/ml。1.1.2动物：清洁级SD大鼠32只，体重200±20g，雌雄各半，由四川大学华西动物实验中心提供,饲养于成都中医药大学附属医院病理生理实验动物中心，自然明暗周期，

3、室温21～23℃。1.1.3主要试剂：肝功ALT、AST试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司，批号080211，10%福尔马林缓冲液由华西医科大学药理实验室提供。1.1.4仪器：KDC-2046低速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司），Sartorius,R180-D电子分析天平，日立7170全自动生化分析仪，LeicaDM4000型显微图像分析系统。1.2方法1.2.1动物分组及给药量清洁级SD大鼠32只，雌雄各半，适应性喂养3天后，称重编号。随机分为4组，每组8只，即正常组（C组）、肝损伤模型组（M组，1000mg/kgD-Galn）黄连解毒汤低剂量组（T1组，0.4

4、9g/ml，临床等效剂量）、黄连解毒汤高剂量组（T2组，0.99g/ml，2倍临床等效剂量）。1.2.2操作过程：试验前一天对大鼠称重，禁食不禁水。实验前D-Galn以无菌NS配制为10%的浓度，根据文献资料3及预试验提示，各组（除C组外）以1000mg/kgD-Galn腹腔注射，C组以等量NS腹腔注射；治疗组造模后，立即以中药10ml/kg灌胃，每日1次，M组、C组则以等量NS灌胃，染毒24h后，对所有动物股动脉放血取血，置于-20℃冰箱待检，随后断颈处死，解剖，观察肝脏大体形态后，取肝脏右叶组织块置于10%甲醛溶液中固定。离心取血清，全自动生化分析仪以连续监测法检测血清ALT,

5、AST，肝脏病理则送四川大学华西医学中心药理实验室常规方法制作HE切片，以Leica显微图像分析系统，以200×的放大率观察。1.2.3统计方法据SPSS13.0统计分析，数据以x-±s表示，采用Dunt’s检验，α＝0.05。2结果2.1对血清ALT、AST的影响：24h时，两治疗组均有降低血清转氨酶的作用，差异有统计学意义（P＜0.05）。2.2肝组织病理学影响光镜下观察，C组：肝索排列整齐，小叶结构完整，肝细胞无变性坏死。M组：肝索排列欠齐，肝细胞脂肪样变，点状坏死，血窦内充血，小叶内广泛炎性浸润。T1组:肝索排列整齐，肝细胞少量变性，血窦内少量充血，小叶内点灶状炎性浸润。T

6、2组：肝索排列较齐，肝细胞脂肪变性明显，血窦内少量充血，散在炎症浸润，与T1组无明显差别。3讨论急性肝损伤是由多种病因引起并有多种因素参与的复杂过程，也是是所有肝病慢性化的始动因素。急性肝损伤,特别是急性重型肝炎,发病急,进展迅速,现代医学对此尚无特效治疗。中医学认为其发病主要和热毒有关，热毒炽盛，加以湿邪秽浊之气，凝胶成痰，或热毒深入营血而导致诸种症状发生。黄连解毒汤便是清热解毒，清热除湿的代表方1。方中选用大苦大寒的黄连为君，清泻心火及中焦之火，臣以黄芩以清上焦之火，佐以黄柏清下焦之火，栀子清三焦之火，导热下行，引邪从小便出。四药合用，苦寒直折，清热解毒，泄浊退黄。D-Galn

7、是一种间接肝毒剂，主要通过干扰肝细胞内UTP代谢，影响物质代谢而引起肝细胞变性，其诱导的急性肝损伤是公认的研究肝炎发病机制及保肝新药的模型4,5。ALT和AST是为最常见的诊断肝脏疾病的指标。正常时主要见于细胞内，其中，ALT主要分布于肝脏和肾脏，AST主要分布于心脏和肝脏。当各种病因使细胞膜的通透性增高或者细胞被破坏时，转氨酶大量释放入血，使得血液中含量增高6，故血清转氨酶水平的高低与肝损伤程度相关。本实验结果表明，黄连解毒汤对D-Galn多种的大鼠血清ALT,AS